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- 2019-04-05 发布于广东
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金银花活性成分绿原酸和不同蛋白质相互
作用机制比较研究探究
[摘要]目的:分析比较金银花活性成分绿原酸
(chlorogenic acid , CGA )与乳铁蛋白(bovine lactoferrin, BLF) 及血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)的分子作用机制。方法:光谱法结合计算机模拟技术 测定药物与蛋白质相互作用的结合参数、能量转移参数与热 力学函数,探讨分子作用机制并比较分析绿原酸与不同蛋白 质的相互作用差异。结果:CGA与BLF的相互作用表现为动 态分子作用机制,而CGA与BSA结合生成静态复合物,结合 强度因温度不同存在一定差异;金银花活性成分与各蛋白质 的结合距离r均很小,说明发生了能量转移现象;分子模 建结果显示药物与蛋白质的相互作用力主要是氢键,兼有范 德华力和疏水作用。结论:计算机模拟与实验测试获得了一 致性结果。
[关键词]绿原酸;乳铁蛋白;血清白蛋白;荧光光谱; 紫外吸收光谱;分子模建
[收稿日期]2013-01-19
[基金项目]国家自然科学基金项目;浙江 省科技创新项目(2112009007)
[通信作者]*郭明,Tel: (0571) E-mail: guoming@zafu. edu. cn 金银花活性成分绿原酸 (chlorogenic acid, CGA)是由咖啡酸(caffeic acid) 与奎尼酸(quinicacid)生成的缩酚酸[1]。CGA具有抗菌、 利胆、降压、抗肿瘤、抗氧化和抗衰老等功效[2]。绿原酸 的药理活性已经应用于食品、医药和日用化工等多个领域。
血清蛋白质高丰度组分含有白蛋白、转铁蛋白(乳铁蛋 白为转铁蛋白家族之一)、免疫球蛋白等。白蛋白、乳铁蛋 白具有贮运内源代谢产物和外源药物分子/离子等重要生理 功能[3-4],是药物分子与蛋白质分子相互作用研究中的理 想模型分子。开展不同种类蛋白质与药物分子相互作用机制 的比较分析研究,对于更全面地了解药物的功效性能、蛋白 质的结构与功能以及蛋白质与药物之间相互作用的本质都 有重要意义。BLF与BSA结构迥异,BLF由689个氨基酸残 基组成,呈二枚银杏叶型”立体结构,包括C叶和N叶, 中间通过“钱链区”联接。每叶又包括2个结构域(N-1和 N-2, C-1和C-2)o在每个叶的2个结构域之间结合铁离子 [5-7] o BSAE8]由582个氨基酸残基组成,空间结构含3个 结构域,每个结构域由2个亚结构域以槽口相对的方式形成 圆筒结构,圆筒内部构成疏水腔。CGA作为一种活性中药成 分与乳铁蛋白的相互作用研究未见报道,也仅有与亲和色谱 HSA (人血清白蛋白)固定相的相互作用研究,故开展CGA 与BLF, BSA相互作用机制的研究非常有必要。
1材料与方法
1仪器与试剂绿原酸(CGA, 299%,南京泽朗医药 科技有限公司);牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin, BLF, 298%),牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA, 298%),三務甲基氨基甲烷(Tris, GR)均购自上海华美 生物工程公司;其他试剂均为分析纯,实验用水为亚沸蒸馆 去离子水。配制0. 1 mol ? L-l, pH 7. 3 Tris-HCl缓冲溶液 (内含0. 10 mol ? L-l NaCl维持离子强度),用此缓冲溶液 配 制 1.0X10-5 mol ? L-1BFL/BSA 溶液及 1.0X10-3 mol ? L-1CGA溶液。F-4500型荧光光度计(日本Hitachi公 司);UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本Shimadzu公司); SGI 02计算机图形工作站。
1.2方法CGA-BLF/BSA荧光光谱及同步荧光光谱测定: 移取2. 5 mL BLF, BSA溶液于1 cm石英比色皿中,微量进 样器逐次加入1.0X10-3 mol - L-l CGA溶液进行荧光滴定 (滴定剂累加体积<200 UL), Tris-HCl缓冲溶液做荧光空 白校正,狭缝宽度为2. 5 nm,扫速200 nm ? min-1,固定激 发波长282 nm,绘制250?500 nm发射光谱;荧光光谱仪扫 描激发和发射波长之间波长差分别为△入=15 nm和△入 =60 nm上述溶液体系的同步荧光光谱。
CGA-BLF/BSA紫外吸收光谱测定:移取2. 5 mL Tris-HCl 缓冲溶液于1 cm石英比色皿中,逐次加入1.0X10-3 mol ?L-1 CGA溶液,使其浓度为1.0X10-5 mol ?LT,测 定200?500 nm紫外吸收谱。
3计算机模拟 利用SGI 02工作站上的DOCK 4. 02程 序包建立药物与蛋白质相互作用模
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