广西巴马小型猪HSL基因表达与2型糖尿病的相关性研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

广西巴马小型猪HSL基因表达与2型糖尿病的相关性研究摘要 广西巴马小型猪HSL基因表达与2型糖尿病的相关性研究 摘要 糖尿病作为严重危害人类健康的慢性非传染性疾病，其患病率呈逐年 上升趋势，其中以2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)为主。脂 代谢异常是诱发T2DM的重要因素之一。激素敏感性脂肪酶(Hormone sensitive lipase，HSL)是脂肪甘油三酯水解的关键酶和限速酶，在脂肪代谢 过程中发挥了至关重要的作用。HSL在肥胖及胰岛素抵抗(insulin resistance， IR)发生过程中有重要作用。但关于HSL在T2DM发生过程中的作用机制 研究较少。本实验通过检测高脂高糖诱导的T2DM发病组、未发病组和正 常饲喂的对照组的广西巴马小型猪脂肪组织和胰腺组织中HSL基因及其相 关基因的表达水平，血清生化指标及胰岛素(Insulin，INS)水平，以及过表 达HSL基因对3T3．L1细胞矛I]13TC．6细胞的影响，从动物和细胞水平初步研 究HSL在2型糖尿病发生中的作用途径。 1．比较分析T2DM组(6头)、未发病组(6头)和对照组(4头)广西巴 马小型猪的血清生化指标和胰岛素水平。结果表明，T2DM组的FBG和INS 水平均显著高于对照组(PD．05)，未发病组的TG、TC、HDL和LDL 水平都显著高于对照组，T2DM组的TG和HDL水平显著低于未发病组。 饲喂高脂高糖日粮能显著改变小型猪血清生化指标和胰岛素水平，有向 T2DM方向发展的趋势。 2．利用QRT-PCR技术检测实验组和对照组巴马小型猪的HSL基因及其相 关基因(ATGL、MGL、LPL、FASN、PPAR3t)的表达情况。结果显示，广 万方数据 西巴马小型猪的心、肝、脾、肾、胰、背最长肌、皮下脂肪组织中均检测 西巴马小型猪的心、肝、脾、肾、胰、背最长肌、皮下脂肪组织中均检测 到HSL基因表达，其中在皮下脂肪中HSL基因表达丰度最高。在皮下脂肪 中，T2DM组的LPL基因表达水平显著高于未发病组和对照组，FASN基 因的表达水平显著低于后两组，HSL基因表达水平显著低于未发病组， PPARy基因表达水平显著低于对照组。在胰腺组织中，T2DM组和未发病组 的HSL和INS基因表达水平显著高于对照组，T2DM组INS基因表达水平 显著高于未发病组。 3．根据GenBank公布的猪HSL基因CDS序列设计引物，扩增广西巴马小 型猪HSL基因CDS序列，进行生物信息学分析。结果显示，广西巴马小型 猪HSL基因CDS序列长2295bp，与参考序列的同源性为99．9％；存在3 处碱基的错义突变，1427 T_A引起HSL的第476位Leu+His，1801 A_÷G 引起第601位Tllr_Ala，1933 A_T卧起第645位Arg，Trp。对广西巴马 小型猪HSL的蛋白预测发现，HSL具有很强的疏水性，有高含量的伐螺旋 及无规则卷曲，较低含量的p折叠，具有7个跨膜结构域，这可能与HSL 作为脂肪酶类有关。成功构建了PLV-HSL慢病毒表达载体，为后续细胞实 验奠定了基础。 4。在3T3．LI前体脂肪细胞和13TC．6细胞中过表达HSL基因。结果显示， 将PLV-HSL重组慢病毒载体质粒和PLV空载质粒分别转染3T3．L1细胞， 过表达HSL，可显著上调MGL基因表达。诱导3T3．L1细胞分化过程中， 相对于PLV组，PLV-／-ISL组HSL、C／EBPa、MGL、LPL、aP2、ATGL、 FASN基因的相对表达水平呈协同变化趋势；从诱导分化后的第4天(Day4) 起，PLV-HSL组细胞培养液中TG浓度显著低于PLv组。将PLV-HSL质粒 Ⅱ 万方数据 和PLV质粒分别转染pTc．6细胞，HSL基因过表达，可刺激INS基因的表 和PLV质粒分别转染pTc．6细胞，HSL基因过表达，可刺激INS基因的表 达。但是，PLV-HSL转染13TC．6细胞48h和72h，细胞培养液中INS浓度 显著低于PLV组。 在食物诱导广西巴马小型猪建立2型糖尿病模型过程中，高脂高糖日粮 刺激脂肪合成关键基因(LPL)表达显著上调，抑制脂肪分解代谢相关基因 (HSL)表达，引发机体肥胖和脂肪代谢障碍；高脂高糖日粮能刺激胰腺组 织HSL基因的表达，显著上调INS基因表达，小型猪血清中胰岛素浓度增 加，长时间维持高水平的血清胰岛素，引发胰岛素抵抗。脂肪代谢障碍和 胰岛素抵抗是诱发T2DM发生的主要病因。研究结果表明，HSL在2型糖 尿病发生中起着重要的调控作用。 关键词： 广西巴马小型猪2型糖尿病HSL基因脂肪代谢胰岛素 III 万方数据 STUDY STUDY oN 1HE R EI。AⅡ0NSHIP BETWE