磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达.pdfVIP

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2019-04-12 发布于浙江
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新疆农业科学2010，47(12)：2505—2509 Sciences XinjiangAgicultural 磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达赵忠润1，包慧芳2，王宁2，周亚飞1，杨慧1，王炜2 (1．石河子大学生命科学学院，新疆石河子832000；2．新疆农业科学院微生物应用研究所，鸟鲁木齐830091) 摘要：【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物，以E．coliJMl09基因组为模板PCR扩增目的基因片段，将得到的目的 BL21 基因定向克隆至大肠杆菌／黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中，构建重组表达载体并转化宿主菌E．coli 100 (DE3)，经IPTG诱导表达后进行SDS—PAGE分析。【结果】通过PCR扩增得到约I bp的DNA片段，经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99．27％的同源性；对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的 kD与理论大小一致的目标蛋白条带。命名为pEC7一C；重组表达载体转化宿主菌，SDS—PAGE分析可见约41 【结论】重组表达载体转化后E．coliB121中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高，证明serC基因在E．coli BL21(DE3)中成功表达，为进一步构建L一丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础。关键词：serC基因；pEC7；基因克隆；原核表达中图分类号：S188+．2 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2010)12—2505一05 and of CloningProkaryoticExpression Transaminase(serC)Gene Phosphoserine ZHAO Wei2 Ya—feil，YANGHuil。WANG Zhong—runl，BAOHui—fan92，WANGNi哥。ZHOU (1．Collegeof哳Sciences，ShihhotzeUniversity，ShihhotzeXinjiang of 1，China) MicrobiologyApplication-XinjiangAcademyofAgriculturalScienes。Urumqi。83009 testwhethertheserC inE．coli onDNA Abstarct：【Objective]To gene efficientlyexpressed．【Method]Based from onthe wascloned E．coli sequenceencodingphosphoserinetransaminase(serC)reportedGenBank，serCgene into aEscheric