鞘磷脂―胆固醇为膜材绞股蓝总皂苷脂质体制备和其质量评价探究.docxVIP

鞘磷脂一胆固醇为膜材绞股蓝总皂昔脂质体制备和其质量评价探究 ［摘要］目的：探讨用鞘磷脂与胆固醇制备绞股蓝总 皂昔脂质体的可行性，并获得最佳制备工艺与处方。方法： 以鞘磷脂和胆固醇为膜材制备绞股蓝总皂昔脂质体；脂质体 以鱼精蛋白沉淀法进行包封率的测定；以包封率为评定指 标，筛选该新型绞股蓝总皂昔脂质体的最佳制备方法；用正 交设计优化该脂质体的制备工艺；用粒径、电位、AFM电镜 表征该新型绞股蓝总皂昔脂质体。结果：用鞘磷脂和胆固醇 制备绞股蓝总皂昔脂质体的最佳制备方法为乙醇注入法，通 过正交设计得最佳工艺为绞股蓝总皂昔与鞘磷脂质量比为 1 : 10,鞘磷脂与胆固醇的比例4 ： 1,缓冲液pH 7.0,水化 温度 45 °C,包封率 79. 06%,粒径 191. 4 nm,电位-33. 16 mV, 电镜下呈规则圆形。结论：用鞘磷脂与胆固醇制备绞股蓝总 皂昔脂质体方法可行，采用最佳工艺制备的绞股蓝总皂昔包 封率高，形态和粒径均较好，重复性好。 ［关键字］绞股蓝总皂昔；脂质体；胆固醇；制备工艺; 正交设计 ［收稿日期］2013-04-14 ［基金项目］国家自然科学基金项目；江苏 省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室项目 (几CBE09021 )；盐城师范学院自然科学基金项目 (09YCKL010)；盐城师范学院教研项目(13YCTCJY046)；盐 酸师范学院博士科研究启动基金项目 ［通信作者］喻樊，讲师，博士，Tel: (0515) E-mai1: HYPERLINK mailto:pharmyufan@163.com pharmyufan@163.com 脂质体由于具有靶向、缓释、增效、减毒等优点，已成 为是中药靶向制剂领域中最受关注的热点之一 ［1］。脂质体 由磷脂和胆固醇构成，磷脂包括甘油磷脂和鞘磷脂2大类。 人们对甘油磷脂研究的较多，如卵磷脂，而对结构与卵磷脂 相似、同样由亲水亲油基团构成的鞘磷脂研究相对较少。鞘 磷脂也能构成生物膜，且它占红细胞膜外膜磷脂含量的一半 以上。由于鞘磷脂形成的是细胞外膜，比形成细胞内膜的卵 磷脂更加牢固，有更好的刚性、更低的离子渗透性和对血浆 的高度耐受性［2-3］ o已有文献报道，鞘磷脂构成的脂质膜 比普通细胞膜在血液中更为稳定［4-6］,鞘磷脂构成的脂质 体还能延长药物在血液循环中的半衰期，具有长循环的特性 ［7-8］,因此对鞘磷脂构成的脂质体开展深入研究很有必要。 绞股蓝总皂昔(gypenosides)对肝癌、肺癌、食道癌、 子宫癌、腹水癌、血癌、皮肤癌等20多种癌细胞有明显的 抑制力［9］。绞股蓝总皂昔对肿瘤的抑制作用，除了直接杀 伤瘤细胞，增强机体免疫功能也是其发挥抗肿瘤作用的重要 途径，其抗肿瘤机制多样［10T3］、抗肿瘤作用的靶点和途 径广泛[14-15],体现了中医药治疗疾病的特点，具有很好 的开发应用前景[16] o 本研究选用稳定性较好和具有长循环功能的鞘磷脂为 膜材制备新型的绞股蓝总皂昔脂质体，以期用于肝炎、肝癌 的治疗，达到减少给药次数和用药量，提高病人顺应性等目 的。 1材料 Zetaplus laser particle size analyzer （Malvern）； Model RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生物仪器公司）； SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）； HZQ-X280恒温振荡培养箱（太仓市华美生化仪器厂）；BS210 型电子天平；WFJ2000可见分光光度计；KBS-150型数控超 声波细胞粉碎机（昆山市超声仪器有限公司）；SCZL-A型数 字智能控温磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；数显 恒温水浴锅HH-2 （国华电器有限公司）；AFM （Veeco公司）。 胆固醇（阿拉丁，批号47269）；绞股蓝总皂昔（陕西昂 盛生物医药科技有限公司，批；鱼精蛋白（Sigma 公司，批号P4672 ）；绞股蓝皂昔对照品（阿拉丁，批号 D100246）；香草醛（上海晶纯实业有限公司，批号v 100115）； 鞘磷脂（Sigma公司，批号E1028）；其他试剂为分析纯。 2方法与结果 2.1绞股蓝总皂昔脂质体（鞘磷脂-胆固醇）的制备方 法筛选［17］ 2. 1. 1乙醇注入法称取绞股蓝总皂昔12 mg.鞘磷脂 60 mg、胆固醇30 mg于100 mL烧杯中，加入乙醇20 mL使 之完全溶解。取pH 7.0的磷酸盐缓冲液（PBS） 20 mL,预 热到45 °C,搅拌下用针头匀速注入烧杯中，恒温搅拌2 h 以除去乙醇，冰浴条件下探头超声10 min （超声时间2 s, 间隔时间2 s,功率100 W）,过0.45 Um微孔滤膜即得绞 股蓝总皂昔脂质体［18］ o 2.