关于坐骨神经再生的机理-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

博士学位论文关于坐骨神经再生的机理 博士学位论文 关于坐骨神经再生的机理 博士研究生：胡莲美 指导老师：朴英杰教授 郑文岭教授 摘 要 周围神经损伤和缺损的治疗是显微外科的难题之一。不少学者从不同角度， 采用多种方法进行了有益的探索，取得了很大的进展。近年来，随着组织工程 学的兴起，对周围神经缺损的修复探索出一条解决问题的捷径。研制可生物降 解的人工神经套管，将此套管植入缺损神经的近端和远端之间，将两端神经连接 起来，在它们之间构建～个有利于神经再生的“微环境”，诱导损伤神经的再生与 修复，将是很有前途的方法。目前，用于套接的材料很多，分两大类，一类是 合成材料，另一类是天然材料。劳杰等证明用硅胶管，并辅以施万细胞，能诱 导正中神经再生。硅胶管有制备方便、不塌陷的优点，但术后会产生致命的神 经卡压现象及炎性刺激，另外需要再次手术取出，所以并不适合临床应用。静 脉管壁做为套管容易塌陷，而且其中的成纤维细胞易形成疤痕，阻碍神经生长。 胶原膜套管具有排异反应小，可吸收、存储方便的特点，适合临床应用。王光 林等以雪旺细胞与PLA构建组织工程化人工神经，修复周围神经缺损的效果接 近于自体神经移植。 我校自1991年以来，采用经序贯生物化学特殊处理的人发角蛋白(human hair keratin．HHK)为医学生物材料，成功研制出HHK人工腱。经动物实验与 临床应用证明，该人工腱不仅具有其它传统医用材料的生物学特性，而且还具 有以下特点：组织相容性好；可完全降解吸收，并能诱导形成具有正常功能的 自体腱形成，从而表明HHK可以作为一种新型的医用生物材料应用于临床。 中文摘要研究表明，将HHK制成套管，套接于离断的坐骨神经两端，发现HHK套管能 中文摘要 研究表明，将HHK制成套管，套接于离断的坐骨神经两端，发现HHK套管能 桥接缺损的外周神经，使损伤的周围神经修复再生，肢体功能恢复正常；而且 还发现连接于神经断端、起定向作用的HHK丝上有大量的施万细胞附着。在 |玎腿诱导自体腱形成的研究也发现，植入的HHK丝上有大量的腱细胞附着， 说明HHK具有良好的细胞附着性。但是HHK诱导坐骨神经再生的机理还不清 楚，在本研究中应用HE染色，免疫组织化学，电镜等方法系统的观察了HHK 诱导坐骨神经再生对的形态学变化，以揭示其诱导神经再生机理。 HHK神经套管还存在着一些缺点，如中空的管腔存在着较大的间隙；管腔 内无桥接体，不利于雪旺细胞的附着；HHK套管壁的孔隙太大，不能有效地在 损伤局部聚集高浓度的细胞因子，不能有效的防止成纤维细胞的浸润，不利于 神经的再生。为此，为了进一步改进和完善HHK神经套管，我们拟将可降解 的HHK为支架材料，以雪旺细胞为种子细胞，构建组织工程化神经，用于周 周神经损伤的再生修复。我们拟在HHK套管腔内充填HHK丝，建立桥接体， 为细胞提供附着体，有效地引导神经再生。然而，充填HHK丝量多少为宦， 如何调控它们的降解，使其在适宜的时间内降解，都需要进一步研究。如果HHK 丝过早吸收则不能引导神经再生，吸收太慢则会使材料滞留体内，对再生的神 经产生局部压迫作用。HHK具有快速、中速和慢速3个降解组分，所以调控 HHK桥接体的降解是可行的。先前构建的HHK神经套管管壁孔隙太大，拟将 管外壁附以胶原膜复合材料，构建具有屏障作用的半透膜。一方面可以在局部 聚集有效浓度的细胞因子，另一方面有效地防止成纤维细胞的浸润，防止疤痕 形成，产生有效诱导神经再生的“微环境”。关于种子细胞施万细胞以何种形式 构建组织工程化神经，现在还存在着分歧，为此，拟将基因修饰和未修饰的施 万细胞分别用于神经的构建，进而评价其效果。 本研究分为二章 第一章体内HHK诱导大鼠损伤的坐骨神经再生的形态学机理 目的观察HHK丝束桥接体诱导坐骨神经再生过程中形态学变化，以揭示坐 II 博士学位论文骨神经再生机理。同时比较HHK复合胶原膜对修复大鼠坐骨神经再生 博士学位论文 骨神经再生机理。同时比较HHK复合胶原膜对修复大鼠坐骨神经再生 的效果 方法制备坐骨神经损伤SD大鼠动物模型，分别植入I-IHK或HHI(+胶原屏障 膜，于术后2d、l、3、6、9、12周取材进行HE染色，免疫组织化学 染色，进行组织学观察。 结果大体观察：HHK实验组术后伤口愈合良好，无排异反应。HHK丝束桥 接体植入体内1周后，肉眼观察神经缺损处两组表现相同； 植入3周 后，HHK丝束桥接体部分降解。植入后9周，HHK丝束桥接体周围 施万细胞增多，HHK减少。植入后12周，可见HHK丝束已被明显降 解吸收，新生神经与『F常神经接头处己牢固的融合在一起。HI-t-K+胶原 屏障膜实验组则发现有坚硬的隆起。切开胶原屏障膜后发现由HHK诱 导所形成的外膜隆起。组织学观察：术后第2d到1周，切除后远、