基因扩增检验标本的处理保存与核酸提取方法.pptVIP

基因扩增检验标本的处理保存与核酸提取方法.ppt

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基因扩增检验标本的处理 保存及;应用聚合酶链反应(PCR)技术;经典的核酸提取方法通常是加去污;由于样本的处理及保存对DNA和;临床常见的标本有血清(浆)、全;临床标本的处理;血清(浆)标本 一些病原;HBV:标本通常由医护人员采集;HCV:检测RNA病毒。由于R;全血标本通常用来提取外周血单个;前处理:1)加适量的红细胞裂解;SDS可与蛋白 质结成复合物,;痰标本痰属于分泌物,临床上常用;具体方法:用无菌平皿取患者肺深;12000 rpm,离心15分;棉拭子 用PCR方法检测性病病;具体方法:加1ml无菌生理盐水;同上,重复洗涤一次弃上清,沉淀;5.体液体液标本,包括胸水、腹;加等体积红细胞裂解液,震荡混匀;6.脓液粘稠脓液:同痰标本处理;7.组织组织有新鲜组织和石蜡切;石蜡切片用于核酸提取,需先用二;标本的保存;血清(浆)HBV:分离出的血清;长期保存:吸取200μl血清,;全血???本全血标本如用于DNA提;痰 液化的痰标本如不立即用于核;组织新鲜组织最好保存于50%乙;总而言之,标本的保存及适当的预;核酸的提取;核酸包括DNA、RNA两种分子;沉淀核酸纯化核酸,去除盐类,有;(一)DNA提取的经典方法 ;经前处理的标本加入蛋白酶K,摇;12000rpm,离心5分钟将;12 000rpm,离心5分钟;12000rpm,离心5分钟弃;说明:回收上层水相时,一定不要;70%乙醇漂洗DNA,是为了去;RNA的提取 RNA提取条件较;蛋白质变性剂可使之暂时失活,但;1.提取RNA所用器皿的处理及;玻璃用品:如烧杯、试管和其他用;DEPC是RNase的强抑制剂;所需溶液的配制:必须用高压灭菌;严格来说,所有溶液均应用0.1;2.RNA提取中RNase污染;实验中,如接触了“脏的”玻璃器;RN A提取方法下面以异硫氰酸;RNase虽可耐受多种处理,(;200μl血清(浆)加入200;加50μl NaAc,500μ;加2.5倍体积无水乙醇,冰浴3;(三)核酸提取的其他方法(简单;2.TRIzol试剂提取RNA;3.旋转离心柱提取旋转离心柱技;把释放出的核酸特异地吸附在特定;此法也可用于DNA测序前核酸的;无标题

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