过氧化氢、还原型谷胱甘肽、卡林-U、内障清对牛晶体上皮细胞生长的影响-眼科学专业论文.docxVIP

常用英文缩写索引CAT 常用英文缩写索引 CAT 过氧化氢酶(Catalase) GR 谷胱甘肽还原酶(GSH reductase) GSH 还原型谷胱甘肽(Glutathione) GSH．Px 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH peroxidase) GSH．TTase 谷胱甘肽巯基转移酶(GSH thioltransferase) GSSG 氧化型谷胱甘肽 H202 过氧化氢(Hydrogen peroxide) Ⅳ盯T 甲基噻唑基四唑 0，一 超氧自由基 ‘02 单线态氧 ·OH 羟自由基 SOD 超氧化物歧化酶 过氧化氢、还原型谷胱甘肽、卡林一U、内障清对牛晶体上皮细胞生长的影响 过氧化氢、还原型谷胱甘肽、卡林一U、内障清 对牛晶体上皮细胞生长的影响 中文摘要 目的：观察过氧化氢(8202)、还原型谷胱甘肽(GSH)、卡林-U和内 障清对牛晶体上皮细胞生长的影响，以及GSH、卡林-U或内障清是否 可以影响H202对牛晶体上皮细胞生长的抑制作用。 。 厂 【方法：培养牛晶体上皮细胞，通过MTT法，观察0、1％、2％、4％、 ＼。 8％和16％血清对晶体上皮细胞在24小时、48小时、72小时和96小 时生长的影响；观察不同浓度H202、GSH、卡林一U和内障清对牛晶体 上皮细胞在24小时、48小时和72小时生长的影响；观察一种治疗自 内障药物(GSH、卡林．U或内障清)与H202同时作用以及先加H202 后加一种治疗白内障药物(GSH、卡林．U或内障清)对牛晶体上皮细 ’ 胞生长的影响。 结果：无血清培养晶体上皮细胞不能存活；在1-16％之间血清浓度越 高，晶体上皮细胞增殖越强；血清浓度为1％可维持晶体上皮细胞存 活。50“M H202即对晶体上皮细胞生长产生抑制作用；125 p M H202 即对晶体上皮细胞产生致死作用：／250 即对晶体上皮细胞产生致死作用：／250 u M H202晶体上皮细胞根本 无法存活。一般浓度的GSH(一400 u M)、卡林-U(≤20 u∥100m1)、 内障清(一200 la．gJ7100m1)对晶体上皮细胞生长无明显影响：高浓度 GSH(≥2mM)、卡林-U(／100 u g／100m1)、内障清(≥lmg／100m1) 均对晶体上皮细胞生长有抑制作用。一种治疗白内障药物与H202同时 作用时，只有400 u M和2mM GSH可以部分阻止H202对牛晶体上皮 细胞生长的抑制作用。先加H202后加一种治疗白内障药物时，所有这 三种治疗白 药物均不能逆转H202对牛晶体上皮细胞生长已经产生 的抑制作用 圹 结论：血清可促进培养的牛晶体上皮细胞贴壁和增殖。本实验中1％血 清浓度是维持牛晶体上皮细胞存活的最低浓度。H202对晶体上皮细胞 生长有抑制作用。一般浓度的GSH、卡林-U、内障清对晶体上皮细胞 生长没有影响。400 u M和2mM GSH可以部分阻止H202对牛晶体上 皮细胞生长的抑制作用。 - 关键词：过氧化氢、还原型谷胱甘肽、卡林一U、内障清、晶体、上皮 细胞 前 前 言 目前较公认白内障的发生、发展与晶体的氧化损伤有关，一方面 是氧化损伤的作用加强，另一方面是抗氧化防御系统的功能降低。 Spector等认为(1)过氧化氢(H202)发挥了重要的作用。H202是活性氧 自由基家族中的一个成员，不带有奇数电子，但具有与自由基一样活 泼的化学性质。它是由超氧化物歧化酶(SoD)将超氧自由基(02一) 歧化形成。H202较02一易穿过细胞膜，高浓度H202对许多细胞有毒性 作用，H202常通过Fenton反应形成羟自由基(·OH)而发挥毒性作 用∞。在氧的毒性产物中，H202最稳定，并且可以进入晶体导致损伤。 一些自内障病人的房水和晶体中H202含量增加，鼠、牛等晶体器官培 养实验中H202可诱发白内障，许多体外白内障模型都有H202形成， 在分子水平，H202和其它产生氧化应力的因子导致DNA、蛋白质和脂 质的损伤，类似于白内障所发生的变化。 因此，本研究采用MTT检测方法研究H202对体外培养的晶体上 皮细胞生长的影响以及GSH、卡林．U或内障清是否可以影响H202对 _ 晶体上皮细胞生长的抑制作用。 1材料和方法 1材料和方法 1．1试剂和仪器： 1．1．1细胞培养的试剂和仪器： (1)D-MEM培养液为Sigma公司产品，按说明配制后经滤器过 滤除菌并分装； (2)胎牛血清(FCS)为血研所科技公司自产，56C灭活30 分钟后分装； (3)胰蛋白酶(Trypsin)(1：250)为GIBCO公司产品， 配制成1％溶液，经滤器过滤除菌并分装； (4)氯化钠 (NaCl)、氯化钾 (KCl)、磷酸氢二钠 (Na2HP04·12H20)、磷酸二氢钾(KH2P04)、碳酸氢钠