鸭疫里默氏杆菌AS87-01740基因生物信息学分析及其原核表达.pdfVIP

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2017，48（11）：2058-2063 ·2058 · ISSN2095-1191；CODENNNXAAB 南 方 农 业 学 报 48卷 DO ：10.3969/j.issn.2095-1191.2017.11.22 鸭疫里默氏杆菌AS87-01740基因生物 信息学分析及其原核表达 1，2 2 2 2 2 1* 2* 单 敏 ，李 涛 ，何 晶，李文海 ，王小兰 ，罗荣廷 ，于圣青 1 2 （广西大学 动物科学技术学院，南宁 530004 ； 中国农业科学院 上海兽医研究所，上海 200241 ） 摘要：【目的】了解鸭疫里默氏杆菌AS 87-01740基因分子生物学特性，确定其编码蛋白抗原性，为鸭疫里默氏杆菌 亚单位疫苗研发提供新的靶标抗原选择。【方法】采用PCR克隆鸭疫里默氏杆菌AS 87-01740基因，以DNASTAR 和 NCBI数据库分别进行基因生物信息学分析；利用pCold-TF原核表达载体在大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表 达，并分别以SDS和Western blotting检测融合蛋白的表达形式及其抗原特异性。【结果】从鸭疫里默氏杆菌基因 组扩增获得的AS 87-01740基因编码框全长618 bp ，编码205个氨基酸，理论分子量约21.87 kD ，理论等电点（pI ）8.2 ，正 电荷氨基酸总数17个，负电荷氨基酸总数16个。AS87-01740蛋白序列在同种属分离株中，与2 型血清型分离株 （11845、YM 、GD和CH-2 ）有很高的相似性（99% ），与1型血清型分离株（CH- 1和CH-3）的相似性为92% ；在不同种属 中，与金黄杆菌（Chryseobacterium sp.）、动物溃疡伯格菌（Bergeyella zoohelcum ）和脑膜炎败血伊丽莎白菌（Elizabeth- kingia meningosepticum ）的相似性分别为61%、60%和57%。经异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG ）诱导表达获得的融合 蛋白分子量约77 kD ，以可溶性表达形式为主。Western blotting检测结果表明，融合蛋白能与鸭疫里默氏杆菌阳性血 清发生特异性免疫反应。【结论】AS 87-01740基因编码蛋白在不同鸭疫里默氏杆菌分离株中具有很高的保守性，且能 与其阳性血清发生特异性免疫反应，是研发鸭疫里默氏杆菌疫苗的潜在抗原。 关键词：鸭疫里默氏杆菌；AS 87-01740基因；生物信息学；原核表达；免疫原性 中图分类号：S852.612 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2017 ）11-2058-06 BioinformaticsanalysisforgeneAS87-01740inRiemerella anatipestifer anditsprokaryoticexpression 1，2 2 2 2 2 SHAN Min ，LI Tao ，HE Jing ，LI Weng-hai ，WANG