海带微卫星标记的开发及遗传多样性研究-生物工程专业论文.docxVIP

：qYliiiiilllllllll91111 ：qYliiiiilllllllll91111 2111111611 116IIII 3L[111711[II 海带微卫星标记的开发及遗传多样性研究 学位论文完成日期： ．纠|。暑。计。 指导教师签字：——』到L 答辩委员会成员签字： 丑洲 二隧 独创声 独创声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (逵!垫逡查基丝孟要壁型直塑丝：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： ．磷 签字日期：凋，年j月刀日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) h 学位论文作者签名： 馘 导师签字： ￡)存 ≯ ● 签字日期：砌7年j月77日 签字日期： 五，，年／月2日 V VI 海带微卫星标记的开发及遗传多样性研究 海带微卫星标记的开发及遗传多样性研究 摘 要 海带是全球重要的经济海藻，也是人工栽培历史最长和产量最高的海藻，我 国的海带栽培面积及栽培总产量均居世界首位。海带在食品、医药、化工等领域 都有很广泛的应用，提取的褐藻胶、甘露糖、碘等工业原料具有较高的经济价值。 经过几十年的发展，海带在人工育种、育苗及栽培方面取得了显著成效，但是有 关海带的分子遗传学研究、经济性状遗传等应用基础研究还是比较薄弱。因此， 积极开展海带的分子遗传学研究将对海带种质保存、新品种培育、亲缘关系鉴定、 遗传图谱构建等方面奠定坚实基础。 微卫星标记作为一种较理想的DAN分子标记技术，已越来越多的用于动植 物遗传学研究中，但是在海带中的研究进展较为缓慢，现公布的可直接用于海带 遗传性状研究的微卫星标记数量仅60对，已不能满足当前海带分子遗传研究的 需要，所以开发一批具有高多态性和高通用性的海带微卫星引物势在必行。本研 究首次采用海带微卫星DNA富集文库大规模测序工作，测序2853个克隆并获 得1092条有效序列，其中593条序列中含有微卫星位点。其中完美型标记351 个，占59％；非完美型标记49个，占8％；混合型标记193个，占33％。在所 有微卫星位点中，二碱基重复类型最多占74．74％，其中CA、GA重复最普遍。 三碱基、四碱基、五碱基和六碱基重复类型分别占11．04％、6．27％、4．59％和3．36％。 使用Primer Premier 5．0软件对微卫星序列进行引物设计，最后设计得到266对 微卫星引物可用于海带分子遗传学研究。 筛选出23对具有多态性的SSR引物对7个不同物种共13个海带配子体克 隆进行遗传多样性分析，23对SSR引物共扩增出69个等位基因，平均每个微卫 星位点有3．0个等位基因。13份海带配子体克隆材料的遗传相似性系数介于 0．4653--0．9901之间，用UPGMA法进行聚类分析结果显示，7个不同物种可分 为两大类，一类全部来源日本，包括利尻海带、真海带、狭叶海带和皱海带四种 海带；另一类全部来源德国，包括极北海带、掌状海带和糖海带三种海带。发现 引物SSR055可在海带属配子体克隆种质鉴定及杂交子代亲缘关系分析中具有一 定的价值。 筛选出102对SSR引物对海带五个栽培种群(三海、福建南方种、荣福、 Vll 爱伦湾、生产种)进行遗传多样性分析，共扩增出185个等位位点，平均每个引 爱伦湾、生产种)进行遗传多样性分析，共扩增出185个等位位点，平均每个引 物扩增出的等位基因数为I．81个。5个栽培群体中检测到的有效等位基因数(肫) 为1．3237-1．4282，NeitS基因多样性指数(Ⅳ)为0．1946-0．2529，香农指数(，) 为0．2912-0．3792，多态性位点比率为54．59％72．43％。五个海带栽培群体间 的遗传分化系数(Fst)值在0．0410--0．2315之间。遗传相似性系数介于0．9044- 0．9837之间，揭示出5个栽培群体的遗传多样性程度由大到小依次为“生产种 “荣福“爱伦湾“三海“福