长春花黄化植原体PY株系的检测与鉴定.pdf

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 长春花黄化植原体（ ）株系的检测与鉴定 ! 蔡 红 孔宝华 陈海如 （云南农业大学 云南省植物病理重点实验室 昆明 7?%$%#） 关键词：长春花，黄化，植原体， 基因，核糖体蛋白基因 #78 -91: 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） 8!7 C77 : %%%#B7$%4 $%% %#B%##7B%! 植原体（ ）（原称类菌原体 ，简称 ）是一类无细胞壁、存在于植 DE0F’G(/HI/ J0K’G(/HI/B(L+ M-N/LHI JOM 物筛管细胞内的原核生物。植原体自#47@ 年被日本学者土居养二首次发现后，迄今为止，世界上报道 的植物植原体病害多达%% 余种，早期对植原体的鉴定主要是通过生物学特性，如症状特征、与昆虫介 体的相互关系等进行的。这些方法费时费力，结果往往也不是很可靠。5% 年代，随着血清学、分子探针 以及D29 技术的发展应用，为植原体的检测提供了一种相对简单、灵敏、可靠的方法。通过对 #78 -91: 基因或核糖体蛋白基因D29 扩增产物的直接测序或扩增产物的9*OD 分析，可对植原体进行鉴定和分 ［］ 类，同时也建立了植原体的分类体系# 。 长春花（ ）为夹竹桃科园艺观赏草本植物。由于植原体可通过具有迁飞性的韧皮 !#$%#$’( %)(*’( 部饲食的昆虫，如叶蝉、飞虱等介体进行传播，所以在自然条件下，长春花很可能感染不同种类的植原体 株系。 为搞清采集到的自然表现黄化症状的长春花植株所感染的植原体株系的种类，本研究采用分子生 物学方法对该植株总P1: 进行植原体#78 -91: 基因及核糖体蛋白基因片段扩增，并对扩增片段进行克 隆、测序，通过核酸序列同源性比较对该株系进行鉴定。 # 材料和方法 #$ # 材料 9 自然显症的长春花（ ）采自云南农业大学校园内。质粒 、 # !#$%#$’( %)(*’( G;QJBR Q/H0 +KF’- SLT/-U 纯化试剂盒为 公司产品；泡桐丛枝病阳性对照、 菌 D29 D-+GH P1: D.-LVLK/FL’ 80HF+I D-’I+N/ + ) ,)-. WJ#%4 株为本室保存；限制性内切酶及其它酶类均为R/X/9/ 公司产品。 #$ % 植株总’( 提取 ［］ 植株总P1: 提取方法参照:E-+H 和8++IY((+- $ 的方法进行。 #$ ) 引物及!*+ 条件 ［，］ ［］ 参照O++ ! 所报道的植原体#78 -91: 基因通用引物及OLI Z 8+/-H ? 报道的植原体核糖体蛋白基因 引物合成下列引物