海带硫酸多糖对人大肠癌Lovo细胞株增殖和凋亡的影响-外科学专业论文.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 ．～躲胀黾 谖毋雾：辫 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 ∥‘ 、 。／ 研究生签名：昨I锄导师签名：P／。 龋年弓月矽日 中文摘要海带硫酸多糖对人大肠癌Lovo细胞株增殖和调亡的影响 中文摘要 海带硫酸多糖对人大肠癌Lovo细胞株增殖和调亡的影响 摘 要 目的：大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率 呈逐年上升趋势。近年来，尽管手术、放疗、化疗等综合治 疗使大肠癌患者的术后生存得到了很大的改善，但疗效并不 乐观。大肠癌患者早期常无明显症状，多数患者就诊时即己 为中、晚期，还有1 5％．35％就诊时就己发生转移，而肿瘤转 移是导致肿瘤患者死亡的重要原因之一。 早在70年代末，人们就发现肿瘤转移可能与一类肝素 样物质作用有关，并对肝素在肿瘤转移中的作用进行了深入 研究。80年代初期，乙酰肝素和乙酰肝素酶的发现为肿瘤转 移研究开辟了新的领域。肿瘤侵袭转移必须突破细胞外基质 (ECM)$D血管内皮下基膜(BM)屏障，硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (HSPG)是一种蛋白聚糖类碳水化合物，为广泛存在于有脊 椎动物和无脊椎动物组织细胞外基质(ECM)并N细胞表面的生 物大分子，是基底膜的主要构成成分。乙酰肝素酶 (Heparanase，HPA)是一种葡萄糖醛酸内切酶，也是目前发现 的唯一可以降解HSPG的酶，它通过切断硫酸乙酰肝素蛋白 多糖侧链(HS)以降解细胞外基质和血管基膜，并通过释放和 活化HSPG结合型的生长因子(如bFGF,VEGF等)诱导血管生 成，从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移。因此，对HPA抑制剂 的研究将成为抗肿瘤药物治疗的新靶点。乙酰肝素酶抑制剂 的设计主要根据乙酰肝素或其它类似物，Parish【1】等选择乙酰 硫酸肝素盐的结构模拟物硫酸低聚糖作为侯选药物研究，因 中文摘要为这些成分可以识别乙酰硫酸肝素盐和抑制乙酰肝素酶裂 中文摘要 为这些成分可以识别乙酰硫酸肝素盐和抑制乙酰肝素酶裂 解乙酰硫酸肝素盐、干扰促血管生成生长因子。在动物实验 中已证实肝素可以抑制肿瘤的生长或转移、抑制血管生成或 损害。虽然它们是抗凝剂，但研究发现消耗抗凝活性后它们 仍然保留抗转移作用和抑制乙酰肝素酶活性的特性。Miao[2】 等证实了肝素和某些硫酸多糖除抗凝作用以外的抗转移作 用归功于它们的抑制乙酰肝素酶的作用，他们观察海带硫酸 多糖对乙酰肝素酶活性和肿瘤转移的作用，发现表达乙酰肝 素酶的B．16、BL一6鼠黑素瘤细胞和13762MAT鼠乳腺癌细 胞乙酰肝素酶降解完整细胞外基质可能已被海带硫酸多糖 有效抑制，而且在有效浓度时，海带硫酸多糖对肿瘤的增殖 和原位生长有抑制作用。应用乙酰肝素酶抑制剂治疗的实验 动物黑色素瘤、lewis肺癌和哺乳动物腺癌细胞肺转移率较对 照组低，有显著差异。且发现海带硫酸多糖也抑制T细胞介 导的迟发性过敏反应和实验性自身免疫反应性脑脊髓炎，因 此对自身免疫性疾病也可能有一定作用。 海带硫酸多糖(Laminaria polysaccharidesulfate，LPS)是 一种含有多种单糖和硫酸基的水溶性杂多糖，其生物学功能 主要集中在抗肿瘤、免疫调节、血脂及血糖调节等方面。海 带硫酸多糖从海带中提取，我国是海带(Laminaria japonica) 生产大国，海带产量占世界产量一半，具有良好的开发应用 前景。而海带是食药两用的褐藻类植物，其药用价值在本草 纲目和嘉佑本草等古医书中已有记载。原材料易得，提取方 法多种。Vlodavskyt31等报道海带硫酸多糖作为乙酰肝素酶抑 制剂在动物实验中能够有效的抑制肿瘤细胞的转移。有文献 报道，体内、外实验证实LPS具有抑制肿瘤细胞增殖的作用， 中文摘要但其分子机制未见报道，本项目从LPS促进细胞凋亡，进而 中文摘要 但其分子机制未见报道，本项目从LPS促进细胞凋亡，进而 抑制细胞增殖及提高化疗药物的敏感性着手研究LPS的药 物作用机理。bcl．2是抗凋亡基因，且与肿瘤的发展密切相关。 它通过其转录产物bcl．2基因蛋白，参与细胞内抗氧化作用 和抑制钙离子跨膜运动而调控细胞凋亡。NT．r,_Bp65是一种 重要的可诱导的基因转录调节因子，参与炎症、免疫、细胞 的增殖和细胞凋亡等多种生理、病理过程的基因调控。近年 来发现NF—rJ3p65调节许多黏附、侵袭、迁移相关因子的转 录而参与肿瘤的侵袭转移，故降低NF．r．_Bp65的表达将成为 治疗癌症的新靶点。通过分析细胞周期变化及检测bcl．2