细胞内蛋白质降解(高级生化课件).pptVIP

细胞内蛋白质降解 ;1．概述 早在1940年代，H.Borsook和R.Schoenheimer用同位素标记试验证明了活细胞组分不断进行更新。细胞不断地用氨基酸合成蛋白质，又把蛋白质降解成氨基酸，这种貌似浪费的过程实际上为细胞提供了防止反常蛋白积累以及控制酶和调节蛋白总量的重要手段。 每一种蛋白质在细胞内的数量一方面取决于它的合成，包括基因转录水平、转录后水平、翻译水平和翻译后水平的调控；另一方面则取决于它的降解。 尽管直到1970代末才真正揭示了细胞内蛋白质选择性降解的分子机制，无论如何，降解是维护细胞内蛋白质水平不可或缺的控制步骤。; 无论何时对细胞内特定蛋白质的动态进行观察，就会发现它像放射性同位素一样服从一级反应动力学。因此通常用半寿期表示其降解速率，即一种蛋白质合成之后被降解一半所用的时间。 细胞内蛋???质的半寿期并不相同，如表5.1所示，大鼠肝细胞酶类的半寿期多在鸟氨酸脱羧酶的11分钟到乳酸脱氢酶的19天的范围内。即使在同一细胞器内，蛋白质的降解速率也不相同，如心肌线粒体中δ-氨基-γ酮戊酸合酶和鸟氨酸转氨甲酰酶比细胞色素的降解要快得多。 这些现象暗示，蛋白质的半寿期取决于它特有的结构和细胞内环境。;? ;;1.1 蛋白酶 为了尽快把蛋白质降解成氨基酸，细胞在进化中形成了许多裂解肽键的酶，即所谓肽酶（peptidase）。肽酶按其作用特点可分为肽链外切酶（exopeptidase）和肽链内切酶（endopeptidase）。 前者包括氨肽酶（aminopeptidase）和羧肽酶（carbaxypeptidase），分别从肽链的N-端和C-端裂解肽键，每次切下一个氨基酸。肽链内切酶即蛋白酶，作用于肽链内部的肽键。细胞内蛋白酶种类繁多，分子大小和结构、作用机制和调节机制以及亚细胞定位等差异甚大，前人按其活性中心必需基团将蛋白酶划分为以下四类：;; （1）丝氨酸蛋白酶（EC 3.4.21）： 其活性中心都有一个，Asp-His-Ser电荷中继网，通过共价催化裂解特定的肽键，都受二异丙基氟磷酸（DIFP）的抑制。 丝氨酸蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）家族和枯草溶菌素（subtilysin）家族，真核细胞的丝氨酸蛋白酶均属前者，其中有许多是分泌型蛋白酶，如胰蛋白酶、弹性蛋白酶、凝血酶、血浆激肽释放酶、脯氨酰基肽链内切酶、精子头粒蛋白酶、组织蛋白酶G和R等。;;; （2）半胱氨酸蛋白酶（EC3.4.22） 其活性中心都有Cys和His，通过共价催化裂解特定的肽键，受低浓度对-羟基汞苯甲酸（pHMB）和碘乙酸等烷基化试剂的抑制。按进化渊源可划分成三个家族：链球菌溶血素（streptolysin）家族；梭菌蛋白酶（clostripain）家族和木瓜蛋白酶（papain）家族，真核细胞半胱氨酸蛋白酶都属于后者，主要存在于细胞溶胶和溶酶体（液泡）内，如组织蛋白酶B、L和H、N、S、M、T、依赖金属的半胱氨酸蛋白酶等。 钙依蛋白calpain (calcium-dependent papain-like proteinase)是一种Ca2+激活的中性蛋白酶，由80kDa的大亚基和30kDa的小亚基组成，在细胞溶胶中降解细胞骨架、受体等长寿命蛋白和一些蛋白激酶。;; （3）天冬氨酸蛋白酶（EC 3.4.23） 活性中心有两个必要的Asp，主要通过广义酸碱催化裂解特定的肽键，受抑胃肽（pepstatin）专一抑制。天冬氨酸蛋白酶仅存在于真核细胞，分子量约30~40kDa，如胃蛋白酶、凝乳酶、肾素、组织蛋酶D和E等。 ;;;（4）金属蛋白酶（EC 3.4.24） 活性部位有必要的二价金属离子，绝大多数情况下是Zn2+，有时为Ca2+ ，分子量17~800kDa，受金属螯合剂如EDTA等的抑制。金属蛋白酶中深入研究过嗜热菌蛋白酶，其中的Zn2+直接参与肽键断裂，Ca2+大概主要稳定酶分子的构象。属于金属蛋白酶的还有ER、线粒体和叶绿体的信号肽酶、成纤维细胞胶原酶、白明胶酶、脑啡肽酶、原胶原C-蛋白酶、meprin等。 还发现一些重要的蛋白酶不属于以上四类，如后面要讨论的蛋白酶体、胱天冬蛋白酶等。;;; 1.1.2 蛋白酶复合物;;;;;;;;1.2 蛋白质降解的生物学意义 最近十几年对各类生物细胞内蛋白降解的研究取得了长足的进展。以植物细胞为例，每个区隔有一个或多个降解途径（图5.1）。;图5.1 植物细胞中蛋白酶和蛋白水解途径的亚细胞定位 图示一个典型的