纳米SiO2固定化-葡萄糖苷酶及其在双相体系中水解大豆异-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６）：７１～７６ 纳米ＳｉＯ 固定化 葡萄糖苷酶及其在双相体系中 ２ β 水解大豆异黄酮的工艺研究 黄　哲　张　涛　林章凛 （清华大学化学工程系　北京　１０００８４） 摘要　纳米材料因其大比表面积、强吸附能力、高机械强度及易分散等特性而备受催化剂载体领 域研究者的关注。采用纳米ＳｉＯ 为载体，通过化学修饰将其用于共价键合法制备固定化酶。发 ２ 现纳米载体可负载１／８（ｗ／ｗ）的葡萄糖苷酶，且回收率达７０％。所得的固定化生物催化剂可用于 乙酸乙酯水双相体系中水解大豆异黄酮，其稳定性比游离酶有明显改善。但纳米颗粒易吸附于 界面上，不利于反应结束后两相液滴的聚并及产物的分离。 关键词　纳米ＳｉＯ　固定化酶　双相体系　大豆异黄酮　酶促水解 ２ 中图分类号　Ｑ５０３ 　　大豆异黄酮是一种植物雌激素，其生物效应相当 ５ ３ 于雌二醇的１０ ～１０，具有选择性雌激素受体调节剂 特性，能双向调节人体雌激素水平，可减轻妇女更年期 ［１］ 综合征，降低激素相关癌症的发生率 ，同时还有延缓 ［２］ 衰老和抗癌的作用 。大豆异黄酮共有 １２种，分为苷 元型（ａｇｌｙｃｏｎｅ）及糖苷型（ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ），其中天然大豆异 黄酮中苷元型只占总量的２％～３％，但是其生理活性 却比糖苷型好得多。目前市售的大部分大豆异黄酮 中，糖苷型的大豆苷（Ｄａｉｄｚｉｎ）和染料木苷（Ｇｅｎｉｓｔｉｎ）含 量超过异黄酮总量的８５％，而其相应的苷元大豆黄素 （Ｄａｉｄｚｅｉｎ）和染料木素（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）则不到 １０％。该４ 图１　天然大豆异黄酮的两种主要组分及其苷元型式 种组分相应的结构如图１所示。 Ｆｉｇ．１　Ｔｗｏｍａｊｏｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｎａｔｕｒａｌ 　　人体摄入的异黄酮需水解成苷元型式才能进入代 ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓａｎｄｔｈｅｉｒａｇｌｙｃｏｎｅｓ 谢途径，但由于个体差异性，人体对糖苷的水解效率不 而水解酶大都溶于水且在水溶液中发挥其优良的催化 同，导致对异黄酮的利用率也不一样，而苷元的差异性 功能，在有机相中容易失活，使得酶的应用成本较高； ［３］ 则不明显 ，所以制备苷元型异黄酮的研究广受人们 从反应产物中不易分离或回收游离酶。 关注。目前由糖苷型异黄酮生产苷元的水解途径主要 　　固定化酶是上世纪６０年代开始逐渐工业化应用 有酸法、碱法、和酶促水解法。酶法水解工艺条件温 ［４］ 的生物催化技术 。固定化酶技术通过将高效但昂贵 和、产物品质良好，是前两者无法比拟的，但酶法面临 易失活的酶催化剂通过物理和化学作用限制在一定的 两个主要问题：由于大豆异黄酮在水中的溶解度较小， 空间范围内，降低外界不利因素对其的影响，可使酶的 收稿日期：２００８０４１４　　修回日期：２００８０５２０ 稳定性、重复利用性得到提高，从而拓宽酶制剂的应用 国家自然科学基金资助项目 范围并降低其使用成本。常用的固定化酶技术有包埋 通讯作者，电子信箱：ｚｈａｎｇｌｉｎｌｉｎ＠ｍａｉｌ．ｔｓｉｎｇｈｕａ．ｅｄｕ．ｃｎ． 法、物理吸附、化学键合以及酶膜反应器法。本文将尝 ７２ 中国生物工程杂志 ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．６２００８ 试采用