犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化.pdfVIP

新疆农业科学2012，49(2)：336—340 Sciences XinjiangA研cultural 22：37：07 DOI：CNl(I：65—1097／S2237．008网络出版时间：2012—3—2 网络出版地址：hnp：／／www．cnki．ne∥kcms／detaiL／65．1097．S2237．008．ht“ 犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核 表达条件的优化与蛋白纯化 简子健，马素贞，中卫红，翟少华，赵森 (新疆农业大学动物医学学院，鸟鲁木齐830052) 摘要：【目的】提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GsT融合蛋白的含量。【方法】研究诱 导剂(IPl’G)的最佳加入时间、诱导剂(I盯G)浓度、诱导时间以及不同温度条件对G”一cDVN融合蛋白表 达的影响，获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件，然后再在最佳条件下大量的表达，用GST—Sepharose4B亲 和层析柱对GST—cDVN融合蛋白进行纯化，得到最大量的可溶性融合蛋白，并对蛋白含量进行测定。【结 mmoL／L，然后 果】大肠杆菌B【21(DE3)转化菌在37℃培养3．5h(0D600=1．314)时，加入InG使终浓度为1 在27℃诱导8h，GST—cDVN融合蛋白可溶性表达量最高，达到o．862mg／mL。【结论】确定了犬瘟热病毒N 蛋白基因的优化表达条件，为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 关键词：犬瘟热病毒；N蛋白基因；融合蛋白；原核表达条件的优化；纯化 中图分类号：S852．65+5文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2012)02—0336—05 of ProteinGeneof of ConditionsN OptimizationProkaryoticExpression CaIline ProteinPurincation DistemperVirus(CDV)and JIAN Sen Su—zhen，SHEN Shao—hua，ZHAO Zi—jian，MA Wei—hong，ZHAI 830052，佩in口) (CoZ2咿Q厂Anim口f胁如ine，瓜彬口昭Agric“Zt“mZ№洫瑙渺，u也删i and orderto thedissoluble levelofGsT—cDVN Abstract：【ObjectiveMethod】Inimprove expression fusion in various conditions timeof IPTG J酞c^e矗c而io innuenceof protein co如，the expressing includingadding timeand toGST—CDVNfusion wasstudiedintllis ，IPlrGconcentration，inductiontemperature protein