玉米大豆复合ACE抑制肽的分离纯化及结构初探.pdfVIP

2010年7月 中国粮油学报 V01．25，No．7 oftheChineseCerealsandOilsAssociation Jul．2010 第25卷第7期 Journal 玉米大豆复合ACE抑制肽的分离纯化及结构初探 王 进1，2 何 慧1 石燕玲1 陈志虹1 (华中农业大学食品科技学院1，武汉430070) (北京大发正大有限公司2，北京101308) G一25柱层析、大 摘要为了探明ACE抑制活性玉米大豆复合肽的结构，采用超滤、Cu“一Sephadex 孔树脂脱盐对复合肽进行分离纯化后，采用HPLC—MS／MS对其中一种复合肽进行了结构鉴定，初步探讨了 dex G一25柱分离后得到两个级分——复合肽I和复合肽Ⅱ，前者的ACE抑制活性明显高于后者。复合肽中 于ACE抑制活性的提高。 关键词 玉米大豆复合肽血管紧张素转化酶分离 纯化结构 中图分类号：Q514 文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2010)07—0021-05 目前，已从不同食物蛋白质酶解物中分离鉴定 试验采用超滤、Cu“一葡聚糖凝胶配位色谱、RP— 出大量的生物活性肽。在对这些肽的研究过程中， HPLC等方法，从玉米大豆酶解物中分离纯化ACE 从蛋白水解物中提纯并鉴定肽的结构是最繁琐和复 杂的，现代分离科学理论得出电泳和色谱是目前所 抑制肽的结构。上述工作目前尚未见文献报道。 知的分离效果最佳的两种方法，但电泳最适合用于 分离分子质鼍较大的化合物，而对于小分子肽的分 l 材料与方法 离效果并不理想，反相高效液相色谱(RP—HPLC)可 1．1 材料 用于绝大多数肽类化合物的分离纯化。RP—HPLC 1．1．1主要试剂及原料 中，流动相以水为基本组成部分，与肽的生物学性质 玉米黄粉：莲花味精厂；大豆蛋白粉：湖北云梦 相适府．虽然流动相中的酸、有机溶剂以及固定相均 可能使肽的天然构象发生变化，但当这些因素除去 血管紧张素I转换酶试剂盒：海军总医院；三氟乙酸 后，肽构象一般能恢复原状，有分离效果好、分辨率 高、回收率高的特点，故在多肽的分离纯化和制备中 酶(24万U／g)：丹麦Novozymes公司。 备受青睐oJ。早在1986年，人们就用liP—HPLC对 1．1．2柱层析材料 神经肽进行了分离纯化，Boyes等报道了用连续RP —HPLC对细菌原液中的重组性淀粉状蛋白前体多换树脂：南开大学化工厂；717阴离子交换树脂：国药 肽段进行分离一J。因此，lip—HPLC是目前分离纯 集团化学试剂有限公司购得；DA201一C大孔树脂： 化和制备多肽的主要手段，经纯化后的多肽再结合 江阴有机化工厂；螯合型离子交换树脂：天津光复精 液质联用技术可对其结构进行鉴定一J。玉米大豆复 细化工研究所；高效液相色谱分析柱C18柱：大连依 配蛋白经Alcalase碱性蛋白酶水解后，生成了具有血 利特分析仪器有限公司。 管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的肽类化合物。本 1．1．3主要仪器 基金项目：国家自然科学基金，湖北省自然科学基 金(2005ABA