04第五章 离子交换层析(new).ppt

第四章 离子交换层析 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC） 是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。 Ion-exchange chromatography 离子交换层析是生物化学领域中常用的一种层析方法，广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核苷酸等的分离纯化。 Ion Exchange - charge 本章主要内容 基本原理 离子交换剂的种类、性质和选择 离子交换层析的基本操作 离子交换层析的应用 基本原理 离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。 离子交换层析的固定相是离子交换剂，是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。  离子交换剂可以分为三部分： 高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。 电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。 平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂(cation-exchange resin). 阳离子交换反应： ( R?X? ) Y? + A? ? ( R?X? ) A? + Y? 其中R代表离子交换剂的高分子聚合物基质，X? 代表阳离子交换剂中与高分子聚合物共价结合的电荷基团，Y? 代表阳离子交换剂的平衡离子，A? 代表溶液中的离子基团。  平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂(anion-exchange resin )。 阴离子交换反应： ( R?X? ) Y? + A? ? ( R?X? ) A? + Y? 其中R代表离子交换剂的高分子聚合物基质，X? 代表阴离子交换剂中与高分子聚合物共价结合的电荷基团，Y? 代表阴离子交换剂的平衡离子，A? 代表溶液中的离子基团 阳离子交换剂为例简单介绍离子交换层析的基本分离过程。 阳离子交换剂的电荷基团带负电，装柱平衡后，与缓冲溶液中的带正电的平衡离子结合。待分离溶液中可能有正电基团、负电基团和中性基团。 加样后，正电基团可以与平衡离子进行可逆的置换反应，而结合到离子交换剂上。而负电基团和中性基团则不能与离子交换剂结合，随流动相流出而被去除。 通过选择合适的洗脱方式和洗脱液，如增加离子强度的梯度洗脱。随着洗脱液离子强度的增加，洗脱液中的离子可以逐步与结合在离子交换剂上的各种正电基团进行交换，而将各种正电基团置换出来，随洗脱液流出。与离子交换剂结合力小的正电基团先被置换出来，而与离子交换剂结合力强的需要较高的离子强度才能被置换出来。 阴离子交换剂为例简单介绍离子交换层析的基本分离过程。 阴离子交换剂的电荷基团带正电，装柱平衡后，与缓冲溶液中的带负电的平衡离子结合。待分离溶液中可能有正电基团、负电基团和中性基团。 加样后，负电基团可以与平衡离子进行可逆的置换反应，而结合到离子交换剂上。而正电基团和中性基团则不能与离子交换剂结合，随流动相流出而被去除。 通过选择合适的洗脱方式和洗脱液，如增加离子强度的梯度洗脱。随着洗脱液离子强度的增加，洗脱液中的离子可以逐步与结合在离子交换剂上的各种负电基团进行交换，而将各种负电基团置换出来，随洗脱液流出。与离子交换剂结合力小的负电基团先被置换出来，而与离子交换剂结合力强的需要较高的离子强度才能被置换出来。 各种离子与离子交换剂上的电荷基团的结合是由静电力产生的，是一个可逆的过程。结合的强度与很多因素有关，包括离子交换剂的性质、离子本身的性质、离子强度、pH、温度、溶剂组成等等。 离子交换层析就是利用各种离子本身与离子交换剂结合力的差异，并通过改变离子强度、pH等条件改变各种离子与离子交换剂的结合力而达到分离的目的。  以RA代表阳离子交换剂，它在溶液中解离出来的阳离子A+与溶液中的阳离子B+能发生可逆的交换反应: RA+B+ RB+A+ 离子交换的选择性可用其反应的平衡常数表示: 如果在反应溶液中[A+]的摩尔浓度与[B+]的相等: 若 值＞1，即[RB]＞[RA]，这表示离子交换剂对B+的结合力要比对A+的大； 若 值=1，即[RB]=[RA]，这表示其对B+和A+的结合力相同； 若 值＜1，即[RB]＜[RA]，表示其对B+的结合力要