光增白剂对杆状病毒的增效作用及其作用方式研究-微生物学专业论文.docx

硕士学位论文、l、STER’S 硕士学位论文 、l、STER’S Tt{ES!S 摘要 巍罐叁赛g对拜状痪毒具鸯耀效襄僳护作用，能挺嵩虫体对括状病爨敏感 经，这对于扩大秆敬病毒杀虫裁鼢应其j具有羹凝的意义。巍增自裁对轷敬病毒 的增效作用的机理存在两种推测一种观点认为光增白剂怒通过破坏围食膜结 构的完蹙性，促使瓣多的病毒粒子穿越围食膜两发动感染的；另一种意见认为 毙壤巍裁缝延迟孛弱主痰缨怒懿麓落，挺送瘸毒戆复毒l繁皴。零文裂躅戳§一 半乳糖营酶基因为标志基翻的重组曹稽银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV-hsp70／lacz)在中肠组织水平上研究荧光增白剂对该病毒的增效作用 及其增效{乍用方式。 兰豁甜菜夜蛾经嗣骚感染瘸毒盼生物测定袭臻：1％必增自裁FB-28对该 重组病毒具有明显的增效作用。添加荧光增自剂FB-28的病毒感染3龄采甜菜 夜蛾幼虫其LC50从2．31×107PIBs／ml降低到5，18×104PIBs／ml，增效比值达 裂448倍。当痍霉浓褒荛l，55×107 P113／ml瓣，杰曩毒FB-28貔疆∞必4。配 (r=0．9437)，单剂数的病毒液感染3龄幼虫的L1’50为7．0d(r=0．9798)，杀虫速 度提高了34．3％。 诧夕}，对于处予不同虫龄的幼虫进行病毒感染时发现：对3”幼虫瓣力生 物滚定时，荧光滢巍恭鹃增效{譬掰达饔50*,4，聪对4羚葫豹供{麦幼虫透霉予溅定， 荧光增白剂的增效作用却不很明盥，仅为10％。此结果表明荧光增白剂对不同 虫龄阶段的幼虫增效能力存在较大的差异。 逡羁2。25×107 PIB／ml斡瘸毒悬滚感染3话、40蘸蘩凌蛾姥虫。瘸攥感染 后的8h，12h，16h，20h提取中肠组织，按常舰石蟮包埋切片进行洗涤、透明、 浸蜡、包埋、切片、粘片等操作程序，制成遘续切片，在倒鬣显微镜下邂一进 行观察计数。结粜如下： 翁盔中瑟弱羧鹰基强表达警(瘸毒在串嬲部位形成熬瘸娃)数字鬟示：荧 光增臼剂确实可以撬高幼虫对瘸海的敏感性。宓验组幼虫巾肠的报告基阑表达 率(瘸毒在中肠部位形成的病灶)嚣明显高于对照组中幼虫中肠的报告熬因表 达攀。 照终，安验维中供试幼虫孛肠的缀告基因表达黎均睫 感染时间的延长甜嵫高，但在感染后20h发宿，供试幼虫巾豚的报告基黼表达 硕士学位论文～}_、STER‘S 硕士学位论文 ～}_、STER‘S THE)lS 率却有所降低，对此，我们分析其原因可能是由于病毒的感染部位发生了转移。 从瘸海在中肠中澎成的癍灶数爨可戳看出：3憾，40接釉豹魏菜夜蛾幼搬中 赣篷绥中瘸短蘧蓍惑染鼹舞豹延长逐赣壤多。在摇霹薅蠢痨实验缢孛戆癜慧鼗 目明显多于对照组中的病灶数目。W见，荧光埔囱荆的添加誉仅可以加快病毒 在中肠组织的感染，避能增强病毒襁中肠组织的艨染能力。可见，对于处于不 民时龄戆供试楚虫接种痪毒对，漆热荧光瑾自裁螈露挺毫病毒在孛瑟组织串靛 巷染能盘。 从病簿猩中肠中形成的病灶部位可以看出，实验组与对照缀的病灶均靠j髓中 肠的基戚膜，荧光增囱剂鲍加入并不能改变瘸毒猩中肠组织的感染部位。实 验结鬃袭骥，在棼虫躺瘸毒蓑释繇串添热合逶浓漤瓣荧竞增爨裁(§。8l g．mL5) 不会改变病毒在幼虫中肠组织中韵感染部位，却可以提高幼擞对病毒酌敏感 性，增加了病毒毒力。此外，血淋鼹细胞感染观察表明：在幼熙的病毒接种物 串添攘合适浓度的荧搬增鑫裁可黻掇蕙妨虫对病毒静敏感援，产生更多瓣瘸 选。 此外，采用分子探针R18(荧光标记物)标记病毒囊膜，体”分离中肠上 皮细胞，将标记的病毒粒子与离体中肠．I-皮细胞滟台后保温，痕毒吸附2h艨， 遵适捡溺荧建豹变纯寒鼗铡痪毒鞍予与上痰臻憋的融合。簸嚣了艇荧竞耀自裁 是否在膜的融合过程巾存在影响。辩验结栗表躜敛光增自裁影响了病毒与中肠 上皮细胞的融合，荧光增白剂促进丁病毒与中麟上皮细胞的融☆。 美镰谣：蓍器锻纹岌绶重缀核鍪多袁蒋瘸毒、荧竞缮囱麓FB-28、 组织切片、膜的融合、分子探针R18、 硕士学位论文Ⅵ、SfER’S 硕士学位论文 Ⅵ、SfER’S THESIS Abstract It has been demonstrated that optical brightener(or fluorescent brightener)Call enhance viral activity,provide UV pro耗ction for nucleopolyhedrovims(NPVl mad increase host susceptibility．The mechanism enhancement of the optical brightener is not known．Shapiro et．a1．postulated that selected brig