细胞化学染色科目讲解.pptVIP

7.临床意义 增高：细菌感染、类白、AA、急淋、慢粒急变、骨髓增殖性疾病，恶性淋巴瘤。 降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、恶组 * 8.鉴别诊断 慢粒与类白：前↓；后↑。 PNH与AA：前↓；后↑。 急粒与急淋：前↓；后↑。 MDS与慢性再障：前↓；后↑。 病毒感染与细菌感染：前者无明显变化，后者↑。 恶组与反应性组织细胞增多：前↓；后↑。 * （三）酯酶染色 概述 特异性酯酶染色 非特异性酯酶染色 概 述 根据各类细胞所含酯酶特异性高低分为特异性酯酶(SE)和非特异性酯酶(NSE)；特异性酯酶是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特异性酯酶根据水解基质液的PH不同，又分为中性NSE（α-醋酸萘酚酯酶 ），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶），碱性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。 目前常用的是氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色NAS-DCE和α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）+ NaF抑制试验。 1.原理（偶氮偶联法） 氯乙酸AS－D萘酚 AS－D萘酚 + 重氮盐(坚固蓝B盐) * NAS-DCE 不溶性有色沉淀物定位于胞浆内酶所在位 特异性酯酶(CE)染色 基质液 基质液 2.试剂： （1）固定液：10％甲醛甲醇溶液 （2）作用液（基质液） 氯乙酸AS－D萘酚 5mg 丙酮 5-8ml 磷酸盐缓冲液 19ml 坚固蓝B盐 10mg （3）复染液：1%中性红 * 3.染色方法 （1）固定：10%甲醛甲醇液固定30秒，水洗晾干 （2）滴加作用液37℃孵育30min，水洗 （3）1%中性红复染1min，水洗晾干镜检。 * 4. 注意事项： 1.氯乙酸AS-D萘酚溶液应避光，4℃冰箱 保存，变黄或混浊即失效。 2.染色温度37℃效果最好 * 5.结果判断 中性分叶核粒细胞胞浆中见细小，弥漫分布的蓝色颗粒为染色成功的标志。 6.临床意义 粒系除早期原粒外，其余阶段细胞均为阳性，其它各系均为阴性。CE染色对粒细胞白血病有特异性的诊断价值。 * * CE 非特异性酯酶染色（α-NAE） 1. 原理： α-醋酸萘酚 α-萘酚 重氮盐 * α-NAE 形成不溶性有色沉淀定位于胞浆内酶所在位置 7.4~7.6 (坚固盐B) 2.试剂 （1）固定液：甲醛 （2）作用液: α-醋酸萘酚 5mg 丙酮 5-8ml 磷酸盐缓冲液 10ml 固蓝B盐 10mg （3）复染液：10g/L甲基绿水溶液 * * 3.染色步骤 （1）甲醛蒸气固定5-10min，流水冲洗5min晾干 （2）放入作用液37℃1h,流水冲洗。 （3）10g/L的甲基绿溶液复染5min,水洗待干镜检 （4）NaF抑制试验：在40ml作用液中加NaF15mg同样染色后，油镜计数100个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和积分，按公式计算出抑制率，正常小于50%。 A图：急性单核细胞白血病α-NAE染色 原始、幼稚单核细胞多呈强阳性 B图：急性单核细胞白血病 α-NAE氟化钠抑制染色 原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制 （与A图为同一标本） A B 4.结果判断：胞浆内有棕色或棕黑色沉淀物为阳性 染色成功指标：正常部分原始、幼稚及成熟单核细胞呈阳性；部分粒细胞为弱阳性反应；部分成熟淋巴或个别中、晚幼红呈阳性。 * * 5.临床意义：鉴别急性白血病 （1）急单时，原始至成熟单核大多