糖基化工程1资料汇编.pptVIP

糖基化是蛋白质的一种重要的翻译后修饰。糖基化工程是通过对蛋白质表面的糖链进行改造，对蛋白质的结构和功能有重要影响，从而改良蛋白质性质的一种技术。; O糖基化的结构比N-糖基化简单，一般糖链较短，但是种类比N糖基化多得多。糖链中可以糖基化的主要是Ser和Thr，此外还有酪氨酸、羟赖氨酸和羟脯氨酸，连接的位点是这些残基侧链上的羟基氧原子。 ;1.1 N-糖链通常都有一个五糖核心 ;根据它们的外层链结构的不同，可分为：高甘露糖型(High mannose)，杂合型(Hybrid type)与复合型(CoMplex type)。三者之间的区别在于：高甘露糖型只含有多个α连接的甘露糖残基，而复杂型具有以盐藻糖（Fuc）、半乳糖（Gal）和唾液糖（SA）为组分的糖链天线，杂合型则兼由有两种特点。 ;高甘露糖型;复杂型;1.2 O-糖基化 研究比较少， 首先，没有特征修饰序列可做修饰位点预测；o-糖基化的糖链结构比较复杂，至少存在4核心结构。尚未发现可以将0一糖链整体从肽链上游离的内切酶肤上游离需要采用其他的化学手段使o-糖链从多肽上游离。;1.3 糖的不均一性;CHO细胞表达细胞粘附分子;1.3 糖基的合成; 糖蛋白到达Golgi体后，那些最终成为复合性结构的寡糖，通过N-已酰葡萄糖胺转移酶I添加N-已酰葡萄糖胺残基，由Golgi体内的α-甘露糖酶II切除两个甘露糖残基，随后由GlcNAc转移酶加入天线上的GlcNAc残基。同时，Fuc转运酶可能转运一个Fuc到糖链的GlcNAc上。复合型寡糖的合成最后步骤发生在Golgi体的反面囊腔中。此时Gal或SA转运酶催化添加Gal和SA。最后新合成的糖蛋白离开Golgi体，运送到最终目的地。最终的寡糖结构在很大程度上取决于糖蛋白在处理过程中与糖基化酶和糖基化转运酶的作用顺序，以及它们特异性作用，许多不同的酶催化不同的反应，最后形成最终的寡糖结构。;为了探讨寡糖合成加工过程中的控制因素，人们作了大量的实验。从不同种类、不同组织中产生的同一种蛋白，对其寡糖分析有很大的差异。在上述讨论中，特定的N-连接寡糖的合成取决于各种糖基化酶的表达水平，在不同的细胞和组织中，这些酶的相对活性的差异形成不同的寡糖结构。虽然大多数细胞都有能力将相同蛋白连接的寡糖加工成很多不同的结构，如高甘露糖型、复合型等。实际上，单个糖基化位点趋于有一个特征性的寡糖结构，而且可与同一蛋白的其它位点的糖链相区别，其中一个原因是蛋白质在细胞中定位。因此，留在NER上的糖蛋白，没有接触Golgi体酶系，只有高甘露糖型。排出Golgi的糖蛋白由于其大小、构型等方面的因素从而形成不同的糖链结构。;同样，与宿主相关的因素也影响寡糖的加工过程。Hsieh等分析了Sindbis病毒在三种不同的宿主细胞中生长时，产生的糖蛋白两个位点的寡糖结构。他们发现，一个位点只有复合型糖链，与宿主无关，而另外一个位点在鸡胚成纤维细胞中是高甘露糖型，在BHK细胞中为复合型，而在CHO细胞中二者都有。Hsieh认为，在不同的宿主细胞中出现差异的原因可能是由于细胞内加工酶的不同，或糖蛋白在细胞内转运的时间不同，或是加工过程中能否有效接触造成的。 ;另外，细胞中的蛋白质，即使经历相同的糖基化机制和分泌途径，也并非所有的潜在位点均可被糖基化，据估计有10％－30％的潜在糖基化位点不能糖基化。实验进一步表明，不同类型N—糖链的分布也存在着糖基化位点的专一性。如鼠脑Thy-l蛋白，其Asn23仅能为高甘露糖型糖链，Asn74可为杂合型或复杂型糖链，而Asn98则能为任一种N-糖链。因此生物体内的确存在某些因素控制着蛋白质的糖基化，包括：(1)蛋白质的氨基酸序列决定着潜在糖基化位点的分布和数目。例如，EGF模体(motif)中恒定序列CGS／T常能被O-岩藻糖基化。;(2)在糖蛋白的生物合成过程中，糖蛋白的折叠方式，即蛋白质的三维空间结构，影响糖基转移酶与蛋白表面特定序列的接触，从而引起糖链的延伸和添加糖基的不同。 (3)合成糖蛋白细胞中糖基转移酶及相关酶类的表达类型。 (4)细胞中不同糖链加工区域的排列，以及糖链通过这些区域的速率。 因此，糖链加工的控制过程是非常复杂的，而不是简单的某一方面所能决定的。;2. 糖链的生物学功能糖蛋白中的蛋白质是其生理功能的主要承担者，而糖链则对蛋白质的功能起修饰作用。这种修饰作用极其多样化，斯坦利（P. Stanley）指出，这种作用有两大类：分子内作用，如蛋白质的正确折叠、细胞内定位、生物活性、溶解度、抗原性、生物半寿期、蛋白酶敏感性等；分子间作用，如趋靶于溶酶体、趋靶于组织、细胞－细胞黏附和结合病原体等。归根结底，是糖影响着蛋白质的整体构象，从而影响由构象决定的所有功能。;3、糖基化对治疗