滤泡辅助T细胞在骨髓增生异常综合征发病机制中作用的研究-临床医学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 √ 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 通过研究骨髓增生异常综合征（Myelodysplastic syndromes, MDS）小鼠模 型（NUP98-HOXD13 转基因小鼠）外周血象及骨髓象变化、脾脏和骨髓滤泡辅 助 T 细胞(Follicular helper T cells, Tfh)数量及其表面诱导性共刺激分子（ICOS）、 程序化死亡分子-1(PD-1)、CD40L、OX40 的表达情况，以探讨其在 MDS 发病 机制中的作用，进一步阐明机体免疫耐受及免疫监视功能在骨髓增生异常综合 征发生、发展过程中的具体机制，为骨髓增生异常综合征的免疫靶向治疗提供 理论依据。 方法 实验对象 MDS 小鼠模型即 NUP98-HOXD13 转基因小鼠（NHD13 小鼠） (Strain Name：C57BL/6-Tg（Vav-NUP98/HOXD13）；Stock Number：010505） 购自美国 Jackson 实验室，对照选用同源野生型 C57BL/6J 小鼠。实验组及对照 组各 5-10 只，雄性，6-8 周龄。饲养地点为中国医学科学院放射医学研究所动物 中心，饲养环境符合 SPF 级别。 第一部分 观察 NHD13 小鼠外周血象及骨髓象变化。分别选取 13 只雄性 NHD13 小鼠及 8 只与其同源的野生型 C57BL/6J 小鼠作为实验对象，使用全血 细胞自动分析仪对其进行外周血细胞计数，外周血及骨髓细胞涂片经瑞氏染色 后显微镜下观察细胞形态。 第二部分 观察 NHD13 小鼠脾脏淋巴滤泡结构等病理变化，并用免疫组化 方法检测 5 只 NHD13 小鼠和 5 只野生型小鼠脾脏细胞表面 CXCR5 的表达情况。 第三部分 研究 NHD13 小鼠脾脏及骨髓来源滤泡辅助 T 细胞数量及其表面 分子 ICOS、PD-1、CD40L、OX40 的表达情况。分别选取 10 只雄性 NHD13 小 鼠及其同源的野生型 C57BL/6J 小鼠作为实验对象，用流式细胞术分别检测脾脏 及骨髓来源滤泡辅助 T 细胞数量及其表面分子 ICOS、PD-1、CD40L、OX40 的 表达情况。 第四部分 研究 NHD13 小鼠脾脏来源细胞及骨髓单个核细胞内 ICOS、PD-1、 CD40L、OX40 mRNA 的表达。用实时定量 PCR 方法分别检测 8 只 NHD13 小鼠 I 及其同源的野生型 C57BL/6J 小鼠骨髓单个核细胞、脾脏来源细胞 ICOS、PD-1、 CD40L、OX40 mRNA 的表达。 结果 第一部分 NHD13 小鼠外周血白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞、血 红蛋白、血小板数量均明显低于野生型小鼠，且差异具有显著性（P＜0.05）。 NHD13 小鼠红细胞及血小板体积较野生型小鼠明显增大，差异具有显著性（P ＜0.05），NHD13 小鼠表现为大细胞性贫血。NHD13 小鼠红细胞分布宽度及血 小板分布宽度均较野生型小鼠明显增大，二者差异具有显著性(P＜0.05)；与野生 型小鼠相比，NHD13 小鼠的红细胞及血小板相对大小不均。NHD13 小鼠外周血 涂片显示白细胞数量、红细胞数量和血小板数量均较野生型小鼠减少。转基因 小鼠红细胞体积明显增大。转基因小鼠骨髓中可见双核红细胞、环状核粒细胞 和红系造血岛等。 第二部分 与野生型小鼠相比，NHD13 小鼠脾脏内淋巴滤泡及生发中心均 明显减少，红髓增宽。免疫组化结果显示 NHD13 小鼠脾脏细胞表面 CXCR5 的 表达明显低于野生型小鼠，而 PD-1 的表达明显增高。 第 三 部 分 NHD13 小鼠 脾 脏 来源 Tfh 细 胞 数 量 明 显 少 于野 生 型 小 鼠 （P0.05），其表面分子 ICOS、CD40L、OX40 的