家蚕ovo及out基因的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 苏州大学学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、 中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索。 涉密论文口 本学位论文属 在——年一月解密后适用本规定。 非涉密论文囱 论文作者签名：萑妄担 Et 期：丝ff：生：Z 导师签名：一二!蕉!墨赵 日 期：2 1 1：!：z 家蚕卵巢生殖发育相关基因的研究 家蚕卵巢生殖发育相关基因的研究 中文摘要 中文摘要 果蝇(Drosophila)卵巢的正常发育需要一系列基因共同参与，其中OVO和otu 基因与卵巢发育密切相关。家蚕是鳞翅目昆虫的模式种，有关家蚕卵巢发育相关 基因及分子机制的研究报道甚少。本研究以GenBank中已公开的果蝇(Drosophila melanogaster)OVO蛋白B亚型(GenBank登录号：NP 726971)氨基酸序列为 基础通过电子克隆的方法获得家蚕OVO(Bmovo)。通过RT-PCR在家蚕精巢、卵巢 组织中分别获得了Bmovo基因的3种可变剪接亚型，分别命名为Bmovo．J『、Bmovo一2 和Bmovo．3。 同源比对显示BmOVO．1和BmOVO．2各含有1个第18家族壳多糖酶 (chitinase)的活性位点，3个C2H2型的锌指结构基序，BmOVO一3只含有3个C2H2 型的锌指结构基序，暗示BmOVO可能属于转录因子并有可能参与能量代谢。家 蚕卵巢来源的BmN细胞定位结果显示BmOVO主要定位于细胞核。实时定量PCR (Real．Time PCR)结果显示Bmovo mRNA的丰度在家蚕卵巢组织中最高，在血细 胞中最低。Western blotting结果显示Bmovo在卵巢和脂肪体中都能表达。通过RNA 干扰(RNA interference，RNAi)下调和转基因超表达上调Bmovo表达水平初步探 讨了基因的功能，结果显示对家蚕幼虫注射双链RNA(dsRNA)后，与空白对照 组相比实验组蚕卵的受精率无明显变化，孵化率稍微下降，但造卵数下降比较明 显，造卵数下降约15％，并且数据显示造卵数、孵化率的下降是由于对雌蚕注射 dsRNA引起的；雌蚕注射dsRNA后蛹体重、茧层量均增加约10％，雄蚕注射dsRNA 后蛹体重增加约1．O％，但茧层量增加约10．8％；家蚕超表达BmOVO．1对性腺发 育、造卵数、受精率和孵化率等没有影响，GO、G1代能够J下常生殖发育。 以果蝇Otu蛋白B亚型(GenBank登录号：NP 51 1089)的氨基酸序列为基 础通过电子克隆的方法获得家蚕out(Bmotu)基因序列，RT-PCR结果显示Bmotu 基因在精巢中有4种可变剪接亚型，但在卵巢中只有1种。Microarray数据库分析 显示Bmotu基因的可变剪接体具有组织表达差异。生物信息学分析发现Bmotu编 码的蛋白与果蝇Otu蛋白结构类似，含有半胱氨酸蛋白酶结构域(Otu结构域)， Tudor结构域，脯氨酸基序。研究结果为阐明家蚕生殖发育分子机制奠定了基础， 为性腺发育的遗传操作提供了靶基因。 中文摘要 中文摘要 家蚕卵巢生殖发育相关基因的研究 关键词：家蚕，生殖发育，RNA干扰，超表达 作 者：薛高旭 指导老师：贡成良 Studies Studies on the OVO and otu genes in S ilkworm，Bombyx mori Abstract The normal development of ovary in Drosophila requires the involvement of a ’series of genes，among which are the OVO and otu genes that have a close relationship with the ovary development．The silkworm is the typespecies of Lepidoptera and th