家蚕减数分裂阻滞基因及RNA和输出因子结合蛋白基因的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

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苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定, 苏州大学学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定, 即:学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、 中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索。 涉密论文口 本学位论文属 在——年一月解密后适用本规定。 非涉密论文口 导师签名:盔叠趁日 期: 羞 论文作者签名:盆垒垒 日 期: 资助项目国家自然科学基金项目 资助项目 国家自然科学基金项目 江苏省自然科学基金项目(BK200911 7) 家蚕减数分裂阻滞基因及R№和输出因子结合蛋白基因的研究 家蚕减数分裂阻滞基因及R№和输出因子结合蛋白基因的研究 中文摘要 中文摘要 果蝇(D,D5印向i肠聊P^册Dg珊,P厂)减数分裂阻滞基因腑口fJ,,是减数分裂G『2.M周 期和精子形成所必需的。为了探讨家蚕(BD,,2咖朋D,f)砌口陟在生殖细胞发育过程 中的功能,利用Ge征Ialll(中已公开的锄口纱序列进行BlaSt搜寻,电子克隆了砌以砂 基因的cDNA序列,在此基础上通过ImPCR克隆了占切口纱的cDNA序列。测序 结果显示,砌口纱cDNA序列与预测结果一致,ORF全长1713bp,编码570aa;结 构预测结果显示Bn认ly与它们Aly同系物一样具有DIRP(Domain in Rb—related Pach、Ⅳay)结构域。进化分析结果显示昆虫的Aly聚为一类,但不同昆虫之间的Aly 并没有按昆虫所在的目聚类,推测不同昆虫的咖有各自特殊的进化方式;将砌劬P 基因克隆进pGS21a(+)载体进行原核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得了鼠抗BInAly 多抗。免疫荧光实验结果显示,BmAly在细胞质和细胞核中均有分布;qImPCR 结果显示,砌咖在精巢中的表达水平比卵巢高,在其它组织中几乎不表达。为了 进一步探讨砌口纱基因的功能,3、4龄起蚕注射砌劬siRNA后,调查精细胞的 发育以及对蚕卵受精率的影响。结果显示注射aly657 siRNA后,精细胞发育明显 延缓,5龄第1天精细胞的发育大多处于初级精母细胞开始进行第1次减数分裂期, 而正常对照精细胞的发育基本已进入第1次减数分裂中后期; 注射alv657 siI斟A 区蚕卵的不受精卵率为22.20%,而正常对照区蚕卵的受精率为1.76%,表明B掰口如 基因为减数分裂阻滞基因,抑制该基因的表达可阻滞精细胞的发育。 RNA和输出因子结合蛋白(I斟A aIld expon f.actor binding proteins,I逻F)参与 RNA的稳定、加工和输出。本研究参照已公开的家蚕序列(DQ497195.1),通过 RT-PcR克隆了家蚕∥cDNA基因(B聊呦,测序结果显示该基因的开放读码框为 765 bp,编码254 aa,BmREF与果蝇、小鼠(胁J m姗cⅣ,淞)的同源体的氨基酸序列 的一致性分别为49.7%和52.7%。结构预测结果显示BmREF具有I也F家族的与 RNA结合的结构域lU洲,N、C端分别且有I砸F—N和REF.C基序。进化分析结 果显示昆虫的I也F聚为一类,BmI也F与赤拟谷盗(乃f6D,f材历c娜幻刀P册?)、意大利 蜜蜂似p如加P,,咖阳)的REF较为接近。将B朋俚厂基因克隆进pGS2la(+)载体进行原 核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得鼠抗BmREF多抗。免疫荧光实验结果显示, 中文摘要 中文摘要 塞重壅墼坌鍪里堂董里墨型!塑塑些里三堕全堡旦苎垦箜堕壅 BmREF在细胞质和细胞核中均有分布,但主要分布在细胞核中。芯片数据分析显 示召聊阿基因在家蚕幼虫5龄第3天各组织均有较高水平的表达。研究结果显示 BmREF可能在I州A的核输出方面发挥作用,为进一步探讨BmI也F的功能奠定了 基础。 .关键词:家蚕;Aly;REF;基因表达,免疫组化 作 者:钟金凤 指导教师:贡成良 家蚕减数分裂阻滞基因及心A和输出因子结合蛋白基因的研究 家蚕减数分裂阻滞基因及心A和输出因子结合蛋白基因的研究 英文

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