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苏州大学学位论文使用授权声明
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涉密论文口
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非涉密论文口
导师签名:盔叠趁日 期: 羞
论文作者签名:盆垒垒 日 期:
资助项目国家自然科学基金项目
资助项目
国家自然科学基金项目 江苏省自然科学基金项目(BK200911 7)
家蚕减数分裂阻滞基因及R№和输出因子结合蛋白基因的研究
家蚕减数分裂阻滞基因及R№和输出因子结合蛋白基因的研究 中文摘要
中文摘要 果蝇(D,D5印向i肠聊P^册Dg珊,P厂)减数分裂阻滞基因腑口fJ,,是减数分裂G『2.M周
期和精子形成所必需的。为了探讨家蚕(BD,,2咖朋D,f)砌口陟在生殖细胞发育过程
中的功能,利用Ge征Ialll(中已公开的锄口纱序列进行BlaSt搜寻,电子克隆了砌以砂
基因的cDNA序列,在此基础上通过ImPCR克隆了占切口纱的cDNA序列。测序
结果显示,砌口纱cDNA序列与预测结果一致,ORF全长1713bp,编码570aa;结 构预测结果显示Bn认ly与它们Aly同系物一样具有DIRP(Domain in Rb—related Pach、Ⅳay)结构域。进化分析结果显示昆虫的Aly聚为一类,但不同昆虫之间的Aly
并没有按昆虫所在的目聚类,推测不同昆虫的咖有各自特殊的进化方式;将砌劬P
基因克隆进pGS21a(+)载体进行原核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得了鼠抗BInAly 多抗。免疫荧光实验结果显示,BmAly在细胞质和细胞核中均有分布;qImPCR 结果显示,砌咖在精巢中的表达水平比卵巢高,在其它组织中几乎不表达。为了
进一步探讨砌口纱基因的功能,3、4龄起蚕注射砌劬siRNA后,调查精细胞的 发育以及对蚕卵受精率的影响。结果显示注射aly657 siRNA后,精细胞发育明显 延缓,5龄第1天精细胞的发育大多处于初级精母细胞开始进行第1次减数分裂期, 而正常对照精细胞的发育基本已进入第1次减数分裂中后期; 注射alv657 siI斟A 区蚕卵的不受精卵率为22.20%,而正常对照区蚕卵的受精率为1.76%,表明B掰口如 基因为减数分裂阻滞基因,抑制该基因的表达可阻滞精细胞的发育。
RNA和输出因子结合蛋白(I斟A aIld expon f.actor binding proteins,I逻F)参与
RNA的稳定、加工和输出。本研究参照已公开的家蚕序列(DQ497195.1),通过 RT-PcR克隆了家蚕∥cDNA基因(B聊呦,测序结果显示该基因的开放读码框为 765 bp,编码254 aa,BmREF与果蝇、小鼠(胁J m姗cⅣ,淞)的同源体的氨基酸序列
的一致性分别为49.7%和52.7%。结构预测结果显示BmREF具有I也F家族的与 RNA结合的结构域lU洲,N、C端分别且有I砸F—N和REF.C基序。进化分析结 果显示昆虫的I也F聚为一类,BmI也F与赤拟谷盗(乃f6D,f材历c娜幻刀P册?)、意大利 蜜蜂似p如加P,,咖阳)的REF较为接近。将B朋俚厂基因克隆进pGS2la(+)载体进行原
核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得鼠抗BmREF多抗。免疫荧光实验结果显示,
中文摘要
中文摘要 塞重壅墼坌鍪里堂董里墨型!塑塑些里三堕全堡旦苎垦箜堕壅 BmREF在细胞质和细胞核中均有分布,但主要分布在细胞核中。芯片数据分析显 示召聊阿基因在家蚕幼虫5龄第3天各组织均有较高水平的表达。研究结果显示 BmREF可能在I州A的核输出方面发挥作用,为进一步探讨BmI也F的功能奠定了
基础。
.关键词:家蚕;Aly;REF;基因表达,免疫组化
作 者:钟金凤 指导教师:贡成良
家蚕减数分裂阻滞基因及心A和输出因子结合蛋白基因的研究
家蚕减数分裂阻滞基因及心A和输出因子结合蛋白基因的研究 英文
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