患病新生儿TORCH感染筛查方法及基因多态性关联研究-免疫学专业论文.docxVIP

兰州大学硕士学位论文摘要 兰州大学硕士学位论文 摘要 目的 应用巢式聚合酶链反应(N．PcR)、酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Inmonosorbent Assay ELISA)、荧光定量聚合酶链反应(FQ．PCR)检测方法，从新生 儿的外周血出发，一方面，提取其血清中的病毒DNA用于TORCH感染筛查，另 一方面，提取血细胞基因组DNA进行基因多态性研究。探索ELISA与巢式PCR关 联性、巢式PCR与荧光定量PCR关联性、ELISA与荧光定量PCR关联性，研究三 种方法的检出率、灵敏度、特异性、可靠性和重复性，然后对检测方法进行鉴定及 合理性的综合评价，同时，探讨巢式聚合式酶联反应方法检测新生儿病原体感染的 临床应用价值。通过聚合式酶联反应．限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)，观察出 生缺陷新生儿特异性等位基因的频率，探测其基因的易感性。研究基因多态性与 TORCH感染之间、基因多态性与出生缺陷病种之间、TORCH感染与出生缺陷病 种之间的相关联性。 方法 采用酚抽取乙醇沉淀与加热裂解法结合提取新生儿外周血血清中的DNA， 异硫氰酸胍法提取新生儿外周血血清中的RNA后，通过两对引物，一对扩增较大 DNA片段的“外”引物和一对在扩增产物中再扩增小片段的“内”引物。采用巢式聚合 式酶联反应法，分别针对TORCH病毒DNA和RNA高度保守区设计引物并扩增其 病毒DNA及RNA，筛查这些病毒在出生缺陷儿的感染情况；采用酶联免疫吸附法 检测新生儿血清中的IgG、IgM；采用荧光定量PCR筛查TORCH感染状况，以达 到对原始模板量定量的目的；此外，用酚抽取乙醇沉淀法提取新生儿外周血细胞基 因组DNA，用于PCR-RFLP新生儿TORCH感染基因分型。 结果 巢式聚合式酶联反应检测方法检测新生儿TORCH感染：早产儿组 HCMV、HBV、HSV-2、CVB 3感染率分别为63．9％、9．8％、6．6％、23．8％；低出 生体重儿组HCMV、TOX、HBV、HSV02、CVB 3感染率分别为62．3％，6．6％、 11．5％、11．5％、23％；呼吸系统疾病患儿组HCMV、CVB3感染率分别为61．8％、 26．7％；黄疸患儿组HCMV，HSV-2，CVB 3；感染率分别为56．3％，12．5％、29．2％； 先天性心脏病患儿组HBV，CVB 3感染率分别为27．3％、27．3％，这五种疾病组病 原体感染率均高于对照组，差异有统计学意义(PO．05)。新生儿TORCH感染这五 种疾病组病原体检测总体比较，7种病原体阳性感染率，病例组感染明显高于对照 兰州大学硕士学位论文组。酶联免疫吸附法与巢式聚合酶链反应检测方法检测新生儿TORCH感染相比： 兰州大学硕士学位论文 组。酶联免疫吸附法与巢式聚合酶链反应检测方法检测新生儿TORCH感染相比： 酶联免疫吸附法相对巢式聚合式酶链反应检测方法检出率、灵敏度、特异性较低。 实时荧光定量聚合酶链反应方法检测新生儿TORCH感染情况：实时荧光定量聚合 酶链反应检出阳性样本率为0，而巢式聚合酶链反应检出阳性样本率为86．67％，即 巢式聚合酶链反应检出率高于荧光定量聚合酶链反应，差异有统计学意义(PO．05)。 TORCH与基因多态性关联研究：TAPl等位基因Godon 637位点，HCMV感染，黄 疸、早产儿、低体重儿三种疾病组，基因表现型频率差异有显著性(P0．05)。 结论 巢式聚合酶链反应法与酶联免疫吸附法及荧光定量聚合酶链反应比较，其检 出率、灵敏度、特异性较高，可提高筛查的阳性率，减少漏查。对加强母孕期的预 防也是有益的，特别是孕期前三个月，胎盘屏障尚未发育完善，预防各种病毒感染， 提高免疫力在这个时期是至关重要的，同时也促进提高优生优育的质量。巢式聚合 酶链反应是一种简单、有效、经济可靠的技术方法，便于临床上的选择和应用，为 临床新生儿病原体筛查提供了一种检测手段。TORCH与基因多态性关联研究发现： TAPl等位基因Godon 637位点可增加HCMV感染，黄疸、早产儿、低体重儿三种 疾病组增加患病的几率。 关键词 新生儿，TORCH病原体， 酶联免疫吸附法， 巢式聚合酶链反应， 荧 光定量聚合式酶链反应， 限制性片段长度多态性 n 兰州大学硕士学位论文Research 兰州大学硕士学位论文 Research on detection of ToRCH infection and J1 bene polvmorphism ln neWborn intants with diease AB STRACT objective Application ofnested polymerase chain reaction(n·PCR)、