基于中医异病同证理论探讨轮状病毒与HBGA的相关性研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

硕士学位论文泌型75份，非分泌型0份。阴性样本191份，剔除NoV阳性样本40例后总样 硕士学位论文 泌型75份，非分泌型0份。阴性样本191份，剔除NoV阳性样本40例后总样 本151份， 检出A型47份，B型44份，O型50份，AB型10份；Lewis状 态结果Lem+／Le州+132份，Le8+b+／Le。+y+9份，Le8+b一／Le“妒10份：分泌型141 份，非分泌型10份。用SPSS 20．0统计软件，统计方法用f检验，RV阳性与阴 性之间的血型差异Pearson z2=3．047，自由度=3，P值=O．384(P0．05)，即RV 阴阳性之间的血型差异没有统计学意义。Lewis状态用Fisher精确检验， z2=10．659，自由度=2，P值=0．004(P0．05)，Lewis状态在RV感染与否中有 显著性差异，即Lewis状态对RV感染与否有影响。分泌型在RV感染与否中， P值=0．033(P0．05)，数据显示分泌型在腹泻患者中对RV感染与否有显著性 差异，RV感染与HBGA分泌型有关。 通过对健康人群159份唾液进行HBGA表型分析，结果表明，A型为35份， B型39份，O型79份，AB型6份； Le衲+／Le。-y+134份，Lea+6+／Le。妒5份， Le叶卜／Le时Y一20份；即分泌型139份(87．4％)，非分泌型20份(12．6％)。RV 阳性样本HBGA状态如前所述。用SPSS 20．0统计软件对RV阳性和健康对照进 行两组问的x 2检验，结果发现两组问的ABO血型差异Pearson卡方=1．546，P 值=0．672(P0．05)，没有统计学意义；两组间的Lewis状态经Fisher精确检验， P值=O．000(PO．05)，存在显著性差异。分泌型状态经Fisher精确检验，P=0．001 (P0．05)，亦存在显著性差异。结果充分表明：RV感染虽然与患者的ABO 血型状态没有明显相关，但是与患者的分泌型状态存在明显的相关性，RV只感 染分泌型患者，而不感染非分泌型患者。 (二)轮状病毒VP8*与唾液HBGA的结合方式研究 随机选取选取3份轮状病毒P[8】和3份P[4)gD性样本，经one—step RT-PCR 试剂盒扩增VP4区域后，再行高保真酶扩增VP8*，将目的基因VP8*插入Pjet一2 载体后，连接产物转入topl0后行质粒提取。重组质粒与pGEX．4T-1载体经BamH I、Sal I双酶切后切胶回收纯化，线性载体pGEX．4T-1与目的片段VP8*连接后 转化到感受态细胞topl0，经菌落PCR或者菌落摇菌后质粒提取行BamH I和 III 万方数据 摘要Sal 摘要 Sal I双酶切鉴定。对正确插入目的片段的质粒pGEX．4T-1．VP8*再次转化入感受 态细胞BL21，通过挑选菌落摇菌、扩大培养、离心、重悬、超声破菌、离心以 及与GST亲和柱吸附等步骤进行蛋白表达。最后成功表达P[81(GZ023株)和 P[4](GZ705)株样本GST-VP8*蛋白。经对洗脱蛋白进行SDS．PAGE分析，证 实成功获取所需的GST-VP8*融合蛋白。为后续研究VP8*与HBGA的结合模式 奠定了实验基础。 轮状病毒VP8枣与唾液HBGA的结合方式采用ELISA法进行检测。选取84 份配体唾液进行体外结合实验，其中分泌型A型22份、B型17份、0型33 份，AB型3份，非分泌型(N)9份。根据梯度实验结果，选取RVP【8】、v[4】 GST-VP8幸蛋白101ag／ml为最佳反应浓度。实验结果表明：P[8】GST-VP8*结合分 泌型HBGA的OD均值分别为A=I．082，B=0．486，AB=0．590，O=1．151，即其 与HBGA的结合能力为OAABB，而与非分泌型不结合。与其相类似，P[41 GST-VP8*结合分泌型HBGA的OD均值分别为A=0．348，B=0．157，AB=0．186， O=0．334，即其与HBGA结合能力为AOABB，同样的表现为与非分泌型 不结合。就两者而言，RV P【8】较P[4]GST-VP8奉蛋白结合HBGA能力强。该结果 进一步阐明了RV感染与HBGA结合模式。Pf8]、P【4】均能结合分泌型人群，且 P[8】具有更强结合能力(分泌型人群占总人群80％以上)，这很好地解释P[81 和P[4】能成为RV的主要流行株，而P[8]最为流行的原因。 综合以上研究结果，我们首次在中国临床人群中证实轮状病毒感染与I-IBGA 分泌型显著相关，并通过建立体外RV GsT．VP8水／】衄IGA结合模型，证实P[8】和 P[4]均只结合HBGA分泌型，而与非分泌型不结合。该结果初步证明了我们提 出的RV和NoV胃肠炎异病同证的物质基础可能与HB