实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离跟纯化文档资料.pptVIP

实验五 细菌生理生化反应、 免疫标本的观察 实验目的 掌握细菌生理生化反应原理与方法 熟悉细菌的荚膜、芽孢、鞭毛等特殊结构 了解淋巴细胞转化、E-玫瑰花环试验原理 实验材料 培养基：生化培养基 菌种：大肠埃细菌、产气肠杆菌 试剂：柯氏试剂、甲基红、40%KOH、 ?α-6%萘酚 ①单糖发酵试验 直接观察 ②吲哚试验 加入5滴柯氏试剂，振荡， 静置后观察 ③甲基红试验 加入5滴甲基红，振荡， 静置后观察 ④伏普试验 加入0.4mL 40%KOH, 开盖振荡，再加入α-6%萘酚 ⑤柠檬酸盐利用试验 直接观察 * * 微生物学与细胞生物学教研室 实验原理 1.糖发酵试验 不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也 不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。 大肠埃希菌/产气肠杆菌 葡萄糖 CH3COCOOH HCOOH 甲酸解氢酶 H2 + CO2 伤寒沙门菌 葡萄糖 CH3COCOOH HCOOH 指示剂：溴麝香草酚蓝pH6.3(黄)；6.3 pH7.2(绿)；pH7.2(蓝) pH6.3 pH7.2 不同微生物所含酶系统不同，某些细菌含有色氨酸酶， 能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。 大肠埃希菌 色氨酸 产气肠杆菌 色氨酸酶 +H2O CH3COCOOH 吲哚 + 检测： 吲哚 + 对二甲基 氨基苯甲醛 玫瑰吲哚 +H2O 玫瑰红色 吲哚试验阳性。 实验原理 2. 吲哚试验（I） 吲哚阴性。 检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。 大肠埃希菌 葡萄糖 产气肠杆菌 指示剂： 甲酸 乙酸 乳酸 琥珀酸等 分解 甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇 葡萄糖 分解 甲基红pH4.5(红)；pH5.4(橘黄色)。 实验原理 3.甲基红试验（M ） pH4.5 pH5.4 某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。 因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。 大肠埃希菌 产气肠杆菌 2CH3COCOOH CH3COCHOHCH3 + 2CO2 O2 + KOH CH3COCHOHCH3 CH3COCOCH3 CH3COCOCH3 + 胍基 红色化合物 + H2O VP试验阴性。 实验原理 4.VP试验（V） 肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。 大肠埃希菌 产气肠杆菌 大肠埃希菌不能利用柠檬酸盐，故不能在以柠檬酸盐 为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。 产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并 分解柠檬酸盐产生CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变 为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。 实验原理 5.枸橼酸盐利用试验（C） 1.细菌生理生化反应结果观察： 实验步骤 2.细菌特殊结构观察： 实验步骤 ①芽孢 破伤风梭菌 2.细菌特殊结构观察： 实验步骤 ②荚膜 肺炎链球菌 2.细菌特殊结构观察： 实验步骤 ③鞭毛 变形杆菌 3.免疫标本观察： 实验步骤 ①淋巴细胞转化 观察已转化 3.免疫标本观察： 实验步骤 ②E-玫瑰花环 原始记录 列表描述细菌生理生化反应现象 实验结果 1.细菌生理生化反应结果 + I M V C 大肠埃希菌 产气肠杆菌 + + + + - - - 菌 名 + - 糖发酵 *