经典液相色谱法.pptVIP

以液体为流动相的色谱称为液相色谱法。 根据操作形式的不同液相色谱法又可以分为柱色谱法和平面色谱法(planar chromatography)。 色谱过程在固定相构成的平面内进行的色谱法称为平面色谱法。 平面色谱法主要有薄层色谱法（TLC）和纸色谱法。 5. 小结 ⑴　掌握液固吸附色谱法和纸色谱法的分离原理； 　⑵　掌握平面色谱参数及其计算； 　⑶　熟悉平面色谱法常用的固定相及其选择； 　⑷　熟悉TLC的展开剂的选择及其操作方法； 　⑸　掌握经典液相色谱法的定性定量分析方法及其应用 ⑹ 了解离子交换色谱法和薄层扫描法的原理及其应用 4. 样品在薄层色谱上展开，10min时测得组分的Rf值，则20min时的展开结果如何？ A.Rf值加倍； B.Rf值不变； C.样品移行距离加倍； D.样品移行距离增加，但小于2倍； E. 样品移行距离增加，但大于2倍。 5.用吸附薄层色谱法分离极性物质时，若组分斑点Rf值太大，一般可采用什么方法？为什么？ 6.在吸附柱色谱法中，硅胶为固定相，氯仿为流动相，试样中某些组分保留时间太长。若把流动相改为氯仿：甲醇（1：1），保留时间有何变动？试解释之。 例：在薄层板上分离A、B两组分的混合物，当原点至溶剂前沿距离为16.0 cm 时，两斑点质量重心至原点的距离分别为6.9 cm 和5.6 cm，斑点直径分别为0.83 cm 和0.57 cm。 求两组分的分离度及Rf 值。 解： 硅胶G 硅胶 + 煅石膏 硅胶H 硅胶（不含黏合剂） 硅胶HF254 硅胶H + 荧光物质 硅胶GF254 硅胶G + 荧光物质 3.3 固定相 吸附柱色谱的固定相薄层色谱也可以使用,但薄层色谱所用的硅胶、Al2O3粒度比柱色谱更细。 硅胶：40μm, 200目左右 薄层板的铺制 常用平滑玻璃板 软板：吸附剂直接铺涂。缺点：风吹即飞。目前很少使用。 硬板：吸附剂＋黏合剂→糊状→铺板→晾干→活化 粘合剂：羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 活化：晾干的板在110℃活化1h，置于干燥器中备用。 3.4 展开剂选择 物质极性 吸附力 流动相极性 防止 大 强 大 Rf太小 小 弱 小 Rf太大 分离强极性物质，选择强极性展开剂，同时也应考虑固定相的活性 分离混合样品时，先用单一中等极性展开剂尝试，再摸索二元展开剂。 展开剂 Rf（A） Rf（B） 分离效果 苯 0.45 0.42 分不开 苯+甲醇 0.38 0.52 分开 例：A，B两组分的试样 问：A、B哪个组分的极性大 答：B的极性大。展开剂极性增大，极性大的Rf 值增大。 3.5 点样与展开 点样量一般1-几十μg， φ 2-3mm 点样量太大易拖尾 点样位置：距底边1.5-2cm 3.5.1 点样 3.5.2 展开 先饱和15-20min，防止边缘效应 展开剂浸薄层板下端0.5cm，不能浸住起始线 层析缸应密闭 展开方式：单向展开，双向展开…… 本身有色 — 显色剂 紫外灯下显色 日光下显色 碘 硫酸 茚三酮等 荧光薄层板 +荧光物质 紫外吸收物质 定 位 3.6 定性和定量分析 3.6.1 定位 — 荧光薄层板 常用硅胶GF254板 3.6.2 定性分析：比较组分与对照品 Rf值 对未知样品，要几个展开体系均有一致Rf 值，或双向展开法确认。 3.6.3 定量分析 洗脱法 薄层扫描 目视比色 比较色斑大小、深浅。 误差±10-30％. 刮下 溶解 光度法测定 误差±5% 误差5% 4.纸色谱法 4.1 基本原理 分配色谱 载体 滤纸的纸纤维 固定相 滤纸上吸附的水 流动相 与水不相混溶的有机溶剂 操作类似于薄层色谱法，但原理不同 定性参数 Rf Rf 物质极性 极性大，Rf小 极性小，Rf大 展开剂极性 展开剂极性↑ 极性物质Rf ↑ 亲脂性组分Rf ↓ 展开剂蒸气 对Rf 影响较大，应先让溶剂蒸气将层析缸饱和 温度 例: 比较下面三个化合物的 Rf 葡萄糖(a) 鼠李糖(b) 洋地黄毒糖(c) -OH数 5 4 3 亲脂性基团 0 -CH3 -CH2, -CH3 分子极性 a b c Rf a b c a b c 4.2 实验条件选择 先饱和 再展开 点样: ?g ?2-3mm 质地均匀 杂质少 根据组分Rf 值差异 洗脱后以 光度法定量或用薄层扫描仪 直接法或显色后测Rf，与对照品比较 选纸 点样 展开 定性 定量 * 返回章目录 液-固... 离子交... 薄层色... 分析化学课件 纸色谱... 小结 习题 液-固... 离子交..