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第一节 花粉培养花粉培养（pollen culture）：是指当花粉发育到一定阶段，从花药中分离出单个花粉粒，接种到培养基上改变正常发育和机能，不经受精作用而发生细胞分裂并诱导单倍体再生植株的方法。 花粉培养的意义 花粉小孢子发育途径 花粉分离方法 花粉培养的方法 花粉植株形态发生方式 花粉植株的再生与驯化移栽 影响花粉培养的主要因素 一、花粉培养的意义 花粉培养是细胞工程育种中的重要手段之一。 在育种领域花粉培养与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以及转基因技术相结合。是生物技术在农作物育种中应用最广泛、最有成效的方法之一。 二、花粉小孢子发育途径 根据小孢子第一次有丝分裂的情况将雄核的发育分为： 三、花粉分离方法 四、花粉培养的方法 （一）液体培养 （二）双层培养法：在琼脂培养基上部加入薄层液体花粉培养液进行培养。可以保持良 好湿度，利于花粉生长。 （三）看护培养：将单个花粉接种于滤纸上，再置于愈伤组织之上培养。优点是操作简 便，成功率高；缺点是不能再显微镜下直接观察。 （四）微室培养：将花粉接种于一个由上下两个盖玻片与一金属圈封闭围成的小室内，一 定条件下培养。其特点是可以循环供应营养液。最大优点是花粉生长可 以尽量少地受到代谢产物积累的影响。 五、花粉植株形态发生方式 （一）器官发生途径 愈伤组织 适当比例生长素和细胞分裂素的分化培养基 产生芽或根 小植株 六、花粉植株的再生与驯化移栽 植株长至5~6片叶以上大小时可进行移栽。移栽前的驯化：打开培养容器，室内自然光下放置3~4d，取出小苗，洗去培养基，移入准备好的基质中。 七、影响花粉培养的主要因素 （一）供体植株的基因型：基因型不同，诱导形成再生植株的难易程度有较大差异 （二）供体植株的生理状态和栽培条件：植株的生理形态和接种季节对花药愈伤组织 诱导率有显著变化 （三）花粉发育时期：随着供体植株的老化，花粉对离体培养的反应能力大大下降 （四）培养前和培养初期的预处理：预处理措施主要是低温处理。机理：一是低温可 以改变花粉粒第一次有丝分裂的纺锤体轴向；二 是低温作用可以使花粉保持较长时间的活力 （五）培养基：花粉愈伤组织分化为植株需要较低浓度生长素和高浓度细胞分裂素； 花粉植株诱导频率随培养基中蔗糖浓度升高而增大 小孢子培养过程中会产生有毒物质，注意活性炭的添加和培养基的更换 （六）培养条件 第二节 花药培养 一、花药培养的意义 二、花药的采集和处理 三、花药培养 四、影响花药培养效率的因素 五、花药单倍体植株的再生与鉴定 六、单倍体植株的染色体加倍 一、花药培养的意义 为了获得单倍体植株，为基础研究和育种提供有用的材料 二、花药的采集和处理 （一）花药的采集：选取生命力强、颗粒饱满的花药，一 般以花粉单核中、晚期为佳 三、花药培养 （一）培养基 （二）培养条件 （三）培养过程 四、影响花药培养效率的因素 （一）供试材料的基因型 （二）供试材料的生理状态 （三）花粉的发育时期 五、花药单倍体植株的再生与鉴定 六、单倍体植株的染色体加倍 物理方法：温度骤变、机械创伤、电离和非电离辐射 化学方法：秋水仙素化学药剂处理 生物方法：细胞杂交 * * 植物花粉和花药培养 花粉培养 花药培养 （一）小孢子的正常发育 （二）离体培养条件下的小孢子发育 离体培养的原始细胞：花粉 花粉形成植株的途径称为花粉孢子体发育途径 A途径（不均等分裂）：花粉的营养细胞 不均等分裂 数次有丝分裂 花粉粒 多细胞团 胀破花粉壁 胚状体