基因Ⅶ型新城疫病毒糖蛋白特异性抗原表位分析及多肽表达-预防兽医学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 摘 要 新城疫病毒(Newcastle Disease virus，NDV)属于副粘病毒科(Paramyxoviridae) 副粘病毒皿科(Paramyxovirinae)腮腺炎病毒属(Rubulavirus)的成员，其主要结构 蛋白融合蛋白(F)和血凝素一神经氨酸酶(HN)与其致病性密切相关。目前，在我国ND 免疫预防的过程中，发现常规疫苗对于我国的流行毒株有时不能提供良好的免疫保护， 因此寻找一种有效的疫苗是当务之急。研究发现，如果能够确定病毒蛋白的抗原表位， 将儿个病毒株的表位结合在一起，使其产生对不同毒株的抵抗，就可以达到理想的保护 效果。因此，ND表位的研究正是优化疫苗的最佳途径。 本研究首先分析了NDV国内流行毒株F基因的核苷酸序列特点，根据己§HNDV F基因 l一374位核苷酸绘制了系统发育进化树，发现近年来在我国出现的流行株多数都属于基因 Ⅶ型。比较基因Ⅶ型各毒株之间核苷酸序列，发现各毒株之间同源率在91．7％-99．7％之间， 在本实验室分离并保留的毒株中，GX一2—98与其他各毒株之间同源率多数是在95％以上， 具有良好的代表性。因此，我们选取分离株Gx一2—98进行有关ND表位的研究。 ／矛0用所设计的引物分别扩增得NGX一2—98毒株的F基因和HN基因的eDNA片段(分别命 名为Fa、Fb、HNa)，以及NDV分离株SttX一3—99、HLJ-4—95、oH一2—84、Gx一5—97 HN片段。 根据29株NDV HN基因部分编码序列绘$【JNDV系统发育进化树．发现F及HN基因的分型结果 大致相同。 利用Dnastar软件分析了NDV GX-2．98株糖蛋白表位的分布，其中F蛋白上有T细胞 表位11处，B细胞表位8处；HN蛋白1．165位氨基酸的T细胞表位4处，B细胞表位2处。在 氨基酸水平上，基因Ⅶ型HN基因的第65．8】位氨基酸较为保守，与其它各型均不相同(毒 株TW95除外)。 在表位预测的基础上，将临近的表位合并，设计引物并引入酶切位点，以Fa、Fb、 HNa为模板扩增含抗原表位的多肽片段Fl、F2、F3、F4、HNl，克隆到原核表达载体pPRO“HT 上，成功地构建了五个表达载体。经测序鉴定与原序列没有突变及移码后，经IPTG诱导， 有四段含表位的多肽获得了表达。本研究为国内NDV基因Ⅶ型分离株F、HN蛋白特异性表 位的鉴定以及ND表位疫苗的研制奠定了基础。工只～ 关键词新城疫病毒；糖蛋白；表位分析；原核表达、 V ^BSTI矾CTAbstract ^BSTI矾CT Abstract Newcastle Disease Virus(NDV)is grouped under the family of Paramyxoviridae， it causes serious infectious disease and incurred great losses to poultry industry． F and HN protein were main glycoproteins，which affect the virulence of the virus． In recent years，the NDV strains isolated in our country mainly belong to group VB， and it was found that sometimes traditional ND vaccine can’t offer solid protection to ND caused by isolates in China．Epitope is the mini—unit to induce immune response． Identify the epitopes on NDV will laid solid foundation for development of the ND epitope～vaccine． F gene comparison of NDV isolates in China showed that NDV isolates in China are mainly belong to branches ofⅦgroup based on the phylogenetic tree made by the卜374 nucleotide of F gene．NDV isolates in groupⅦshared 91．7％-99．7％in homology．In a11 isolates in our lab，NDV strain GX一2—98 shares homology abore 95％ wit