临床生物化学实验室基本技术跟实验室质量管理资料.ppt

第二章 临床生物化学实验室基本技术与实验室质量管理 第一节 常用临床生物化学分析技术 第二节 常用免疫分析技术(自学) 第三节 生物芯片和生物传感技术 第四节 酶蛋白分离纯化技术(自学) 第一节 常用临床生物化学分析技术 一、光谱分析技术 二、电泳技术 三、离心技术(了解) 四、层析技术 五、电化学分析技术 一、光谱分析技术 (一)吸收光谱分析法 (二)发射光谱分析法 (三)散射光谱分析法 (一)吸收光谱分析法 1.原理：利用物质吸收光谱谱系特征，确定其性质、结构或含量的技术。 2.方法学评价 优点：(1)灵敏度高，检测浓度在10-5~10-2 mol/l范围。(2)操作简便、快速、选择性好和应用广泛。(3)原子吸收分光光度法使用空心阴极灯作光源，谱线简单，由谱 线重叠引起的干扰小(4)原子吸收分光光度法自动化程度高，在复杂样品分析中，可直接测定多种元素。 缺点：(1)比色法需有标准品，有些反应的显色剂本身颜色会影响测定方法的灵敏度和特异性。(2)紫外法的吸收池需用石英玻璃作光学面。(3)原子法需特定元素的空心阴极灯，对难熔元素测定的灵敏度不够理想。 3.类型：可见光及紫外光、原子吸收分光光度法(参考方法)4.临床应用（1）可见光及紫外光法多用于酶试剂终点法及化学法测定的项目 （2）原子吸收分光光度法中用于Ca2+、Mg2+定值或参考方法 (二)发射光谱分析法 1.原理：利用物质发射光谱特征，来确定其性质、结构或含量的技术。 2.类型：荧光分析法：灵敏度高，检测范围广，临床常用。 火焰光度法：操作烦琐，干扰因素多， 已淘汰。 3.影响荧光强度的因素：(1)溶剂。与荧光强度成反比。(2)荧光物质的浓度。F=?I，I是激发光强度。浓度很小且厚度不变时成正比。反之，则反比。(3)温度。多数情况下，与荧光强度成反比。(4)溶液pH。不定。 4.方法学评价：灵敏度高、选择性好、取样量少，但干扰因素较多。 5.临床应用：糖类、胺类、DNA与RNA酶与辅酶，Vit类及Ca2+、Fe3+、Zn2+等。 (三)散射光谱分析法(比浊法) 1.原理：利用光线通过混悬颗粒后产生的散射光谱特征，确定其性质….. 2.类型：散射比浊法：根据光线通过混悬液后，光线减弱的程度来测定其浓度。不需特殊仪器。透射比浊法：速率和终点法。通过光线透过的强度来确定颗粒的浓度。需特殊仪器如激光比浊仪。 3.影响比浊法测定的因素：(1)混悬颗粒大小；(2)颗粒形状；(3)混悬液的稳定性。因此，使用比浊法必须做到：(1)溶液中颗粒的分散度尽可能相同；(2)混浊液至少10min内保持稳定。 4.临床应用：免疫球蛋白、载脂蛋白、补体、ASO、RF等。 二、电泳技术 (一)原理：利用带电粒子在电场中向所带电荷相反的电极移动的性能，对物质分子进行分析测定。 (二)电泳技术的分类与特点 1.移动界面电泳(moving boundary electrophoresis)：已淘汰。 2.区带电泳(zone electrophoresis)：一类是滤纸、醋酸纤维素膜、硅胶 等；一类是淀粉、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶等。其中后者的优点是：(1) 使用细微多孔网状结构支持介质，可消除电荷效应、分子筛效应使分辨率 提高；(2)几乎不吸附蛋白质，电泳无拖尾现象；(3)蛋白质在低浓度琼脂 糖胶电泳时可自由穿透，阻力小，透明度高，敏感性高。因此，取代第一 类电泳 。 CONTINUE (三)方法学评价 设备简单，操作方便，具较高的分辨率及选择性，不足之处是干扰 因素较多。 (四)电泳技术的影响因素 颗粒性质，电场强度，溶液性质，pH值，离子强度，溶液粘度，电 渗和支持物等。 (五)区带电泳的临应用 测定项目有：血清蛋白、血红蛋白、糖化血红蛋白、脑脊液和尿液蛋白、 脂蛋白及脂蛋白(a)、LDH、ALP、CK的同工酶及亚型。 毛细管区带电泳可分离的项目包括：多肽、氨基酸、DNA、酶分子等。?研究热点。 四、层析技术 (一)原理：利用固定相和流动相理化性质的差异而建立起来的分析技术。当流动相(待分离物质)经过固定相时，由于各组分的理化性质差异，与两相发生相互作用(吸附、结合)的能力不同，在两相中的分配不同，随着流动相的推进，各组分在两相中进行不断再分配。与固定相作用弱的组分，受到阻力小，向前移动速度快，反之，移动速度慢，从而达到将样品中各单一组分分离的目的。 (二)层析技术的类型：1.按两相所处状分：液-液层析法、液固层析法、气-液层析法、气-固层析法2.按操作模式不同分：柱层析法、薄层析法、纸层析法、薄膜层析法3.按层析原理分：吸附层析法---固定相是固体吸附剂 分配层析