基质交联分子1对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响-外科学(泌尿外科)专业论文.docxVIP

基质交联分子 1 基质交联分子 1 对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响 中文摘要 I I 基质交联分子 1 对前列腺癌细胞迁移侵袭及 上皮间质转化的影响 中文摘要 背景与目的：基质交联分子 1（STIM1）在多种肿瘤组织中表达增高，并参与肿 瘤生长、血管形成及远处转移。本课题组前期研究表明，前列腺癌组织中 STIM1 表 达明显增高，且与肿瘤分期相关。抑制前列腺癌 PC-3 细胞中 STIM1 表达可抑制 PC-3 细胞增殖、诱导凋亡。为此，我们以短发夹 RNA（shRNA）抑制 STIM1 表达，检测 其表达抑制后对激素非依赖型人前列腺癌 DU145、PC-3 细胞迁移、侵袭能力的影响， 并初步探讨在上皮间质转化（EMT）阳性的 DU145 细胞中，抑制 STIM1 表达对其上 皮及间质标记物表达变化的影响。 方法：合成携带 STIM1 基因 shRNA 的慢病毒载体 STIM1-pGCSIL-GFP，该载体 已证明可有效抑制 PC-3 细胞中 STIM1 表达。以激素非依赖型人前列腺癌 DU145、 PC-3 细胞株为研究对象，将慢病毒载体 STIM1-pGCSIL-GFP 分别转染 DU145、PC-3 细胞（si-STIM1 组），设计空白对照组（Mock 组）及阴性对照组（NC 组）。转染 72 h 后选取转染效率大于 80%的细胞扩大培养用于后续实验。采用 RT-PCR 及 Western blot 验证转染慢病毒载体 STIM1-pGCSIL-GFP 后 STIM1 抑制情况。划痕实验及 Transwell 迁移、侵袭实验检测抑制 STIM1 表达后 DU145、PC-3 细胞运动、迁移及 侵袭能力的变化。以 EMT 阳性的 DU145 细胞株进一步研究，采用 RT-PCR 及 Western blot 分别在 mRNA 及蛋白水平检测 EMT 标记物(E-cadherin、N-cadherin、 Vimentin、 α -SMA)在 STIM1 被抑制前后表达的变化。 结果：转染 72 h 后荧光倒置显微镜下见病毒转染效率大于 80%，感染复数（MOI） =20。RT-PCR 及 Western blot 结果均显示 DU145、PC-3 细胞 si-STIM1 组 STIM1 表 达明显降低。与 NC 组相比，DU145 细胞中 STIM1 mRNA 和蛋白水平抑制率分别为 72%、64%；PC-3 细胞中 STIM1 mRNA 和蛋白水平抑制率分别为 81%、85%，差异 均有统计学意义（P＜0.05）。划痕实验显示两种细胞 STIM1 抑制后运动能力均明显 中文摘要 基质交联分子 1 对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响 降低。细胞迁移结果发现，DU145 细胞中 Mock 组、NC 组、si-STIM1 组每视野细胞 数分别为 87.2±7.3 个、85.4±8.5 个、45.6±4.3 个；PC-3 细胞中 Mock 组、NC 组、 si-STIM1 组每视野细胞数分别为 61.8±3.3 个、58.4±6.2 个、34.1±6.3 个。分别与 各自 NC 组相比，两种细胞 si-STIM1 组迁移细胞数目显著减少（P＜0.05）。细胞侵 袭实验提示，DU145 细胞 Mock 组、NC 组 和 si-STIM1 组每视野细胞数目分别为 96.6 ±9.3 个、99.1±10.4 个、52.6±6.7；PC-3 细胞 Mock 组、NC 组 和 si-STIM1 组每视 野细胞数目分别为 32.4±4.6 个、35.1±3.9 个、19.3±3.2 个。si-STIM1 组与各自 NC 组相比，细胞侵袭数目明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。对 DU145 细胞株 进一步研究，RT-PCR 和 Western blot 结果显示，si-STIM1 组上皮标记物 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达增高（分别为 NC 组的 1.81 倍、3.81 倍）；间质标记物 N-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达降低（分别为 NC 组的 0.44 倍、0.69 倍）,Vimentin 的 mRNA 及蛋白表达降低（分别为 NC 组的 0.50 倍、0.77 倍），α -SMA 的 mRNA 及蛋白表 达降低（分别为 NC 组的 0.49 倍、0.67 倍），各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 1. 前列腺癌 DU145、PC-3 细胞的细胞运动、细胞迁移及细胞侵袭能力与细胞中 STIM1 表达水平密切相关； 2. 抑制 DU145 细胞中 STIM1 表达后，上皮标记物 E-cadherin 表达增高，间质 标记物 N-cadherin、Viment