硕士生物仪器分析之液相色谱课件.pptVIP

Two-Dimensional Electrophoresis (2D-GEL) Protein Characterization /New_Folder-1/HPLC-Analysis.htm 共产党员在政府工作中，应该是十分廉洁、不用私人、多做工作、少取报酬的模范。共产党员在民众运动中，应该是民众的朋友，而不是民众的上司，是诲人不倦的教师 高效液相 色谱分析 High Performance Liquid Chromatography 简介 基本原理 特点 仪器流程及主要部件 分离模式 应用与发展动向 High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to separate compounds that are dissolved in solution. HPLC instruments consist of a reservoir of mobile phase, a pump, an injector, a separation column, and a detector. Introduction Compounds are separated by injecting a plug of the sample mixture onto the column. Understanding how a chromatographic column works - Bands Introduction The different components in the mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase. Introduction The HPLC System GC system 气相色谱仪由以下五大系统组成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。 HPLC system 气相色谱仪由以下五大系统组成：液路系统（梯度冲洗装置） 、进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。 HPLC system 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。 不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。 经典的液相色谱法：常压，固定相柱效低，分析周期长。 现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9?107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 HPLC system - Principle 液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。 分配系数的差异 反相 (reverse phase, RP) 正相 (normal phase, NP) 等度 (isocratic) 梯度 (gradient) 定性分析 (qualitative analysis) 定量分析 (quantitative analysis) 分析型 (analytical HPLC) 半制备型 (semi-preparative HPLC) 制备型 (preparative HPLC) 工程级 (engineering level) 液相系统操作 高效液相色谱量级 分析目的 色谱柱 HPLC system - Solvents 化合物的极性是由分子中所含官能团的种类、数目及排列方式等综合因素决定。 常见能团极性强弱顺序是：R–COOH Ar–OH H–OH R–OH –NHC=O–CH3 R–NH2 R–SH R–CHO R–CO–R’ R–COOR’ R–N(Me)2 R–NO2 ROCH3 –CH=CH– –CH2–CH2– 利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。 色谱法 吸附色谱法 利用组分在固定相（吸附剂）上的物理吸附能力的差异而达到分离的方法 分配色谱法 利用组分在固定相（固定液）中溶解度不同而达到分离的方法 离子交换色谱法 (IEC) 利用组分在固定相（离子交换剂）上的亲和力大小不同而达到分离的方法 凝胶色谱法