家蚕AFLP标记连锁图的构建及全茧量、茧层量的QTL定位研究-特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

中文摘要 - 中文摘要 蚕丝具有重要的经济价值，家蚕生丝的多少即家蚕全茧量和茧层量是影响蚕丝产量和质 量的重要经济性状，利用分子标记对这些性状基因进行定位分析，即研究控制全茧量和茧层 量的基因数目、位置和基因效应，找到主效基因，并对杂交后代分子标记的动态变化作连续 跟踪，以找出它们与分子标记的动态规律，开展辅助选择育种方面的研究，对真正从分子水 平上操纵家蚕一些重要性状基因，并指导家蚕品种遗传改良具有重大意义:同时有色茧的利 用，特别是对丝索中含有天然色素的绿草的利用具有广阔的前景，所以利用分子标记技术寻 找与绿茧基因紧密连锁的标记，并将绿茧基因进行定位，对加速优质绿茧蚕品种的育成具有 重要的意义。 本试验在已有研究的基础上，利用了两个遗传差异较大的家蚕品种大造和 C100作为亲本材 料，并饲养了 BCl (ClOO ♀X(大造 XC 1叫的代，从BC1随机抽取 44 个个体，分别调查个体的全 茧量、茧层量重量，并以个体为单位将各调查个体对号装袋取样， -701:冷藏备用，作为抽提 DNA 的样品，再利用AFLP标记技术，构建了家蚕AFLP标记高密度图谱，并借助这个图谱进 行了Gc的定位及全茧量、茧层量的Qη4定位研究，主要结果如下: l 带型特征 本研究用 96 对引物共扩增出 8522 条可区分的 DNA 带型，平均每组引物扩增出 89 条带: 有 5204 条多态性带，占总扩增带的 61.1%; 多态性位点中 1744 个位点符合川的比例，占总 多态性位点的 34%; AFLP 标记的偏分离比约为 46.70/00 不同引物组合产生的扩增带数、多态 性带数、有效位点数因引物选择性碱基不同而存在显著差异，说明家蚕基因组对选择性碱基 的组合扩增存在偏好性。 2 不同标记数的作图比较 本研究分别对家蚕 BC1的 660、699、759 个有效标记进行了连锁分析，并比较了用这些标 记所构阁的图谱特征。结果发现 t 分群方面，分群数随着标记数培加而增加:随着标记数增 多，所形成的二联体和遗传图距为 0 或者太大的三联体、四联体、五联体、六联体数也逐渐 增多。图谱特征方面，随着标记数的增加，进入连锁群的标记数、总图距和平均位点图距都 有上升的趋势: 759 个标记的平均图距最大，但所构图连锁群之间平均图距分布最均匀:随 着标记数增多，连锁位点数增加. 759 标记的位点最多，为 558 个:随着标记数的增加，最大 图距减小， 660 标记中标记间最大图距为 345.4 cM ，669 标记和 759 标记间的最大图距相同， 为 74.1 cM 比陈大霞等所作图谱标记间的最大图距小 349.8 cM (陈大霞所作图诺的最大图 距为 423.9 cM )，大大缩小了空白区域。综上所述，再考虑到希望构建的连锁图应尽可能覆 西南农业大学硕士学位论文 盖家蚕全基网组和满足 QTL定位的要求，发现 759 个标记的分群和作图效果较好 c 3 家蚕 AFLP 标记连锁图谱的构建 本文在综合考虑作图及 QTL 定位效果基础上，采用 759 个标记类型构图。构图参数为 E LOD3战重组值 0.20，所拘留谱结果如下z 3.1 本研究构建了一个含 33 个连锁群，共 sss 个 AFLP 标记的连锁图谱。家蚕具在 28 个 连锁群，而本文构建的连锁群数大于 28，说明本文所构建的连锁群有些应是相互连锁的，只 是本实验缺乏特定的标记将其整合在一起. 3.233 个连锁群总长 6320.2 cM，平均长191.ScM; 标记间因距为 O74.1cM; 位点间的 平均距离为 12.OcM: 平均图距小于 lOcM 的连锁群 10 个，大于 lOcM 小于 20cM 的连锁群 20 个，大于 20cM 小于 30cM 的连锁群 3 个; 33 个连锁群上标记数变化范国是 5--53 个，各连锁 群上位点平均数为 17 个. 3.3 Gc， 基因被定位于 27 连锁群的 P8Tl-37 与阿T牛83 标记之间.由于 Gc 基因位于家蚕 15 染色体上，表明本文构建的 27 连锁群与家蚕的 1S 染色体存在一定的联系. 3.4 连锁群长度与标记数量正相关，即当一个连锁群上的标记数目较多时，其长度也相应 地增长，同时连锁群中标记有成簇的现象，估计是由两个原因引起的 z 第一，位点向本身连 锁较为紧密:第二，本研究中作图群体个体致的限制，不能有效分辨图距较小的两个标记。 本研究构建的是一张密度较高的 AFLP 分子连锁图，为后一步的 Q1L基因定位和分子标 记辅助选择 (MAS) 奠定了基础. 4 家蚕全茧量、茧层量的 QTL 定位研究 4.1 数量性状调擎前后结果 由于遗传背景的复杂性，数量性状的分布不仅表现为单峰正态分布，而且常表现为偏