急性缺氧对SD乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元钾电流的影响-生理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Effect of acute hypoxia on the potassium channels current of cochlear spiral ganglion neurons in SD newborn rats A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Natural Science By Wang Yanping (physiology) Dissertation Supervisor: Associate Prof. Li Li May, 2015 万万数据 万万数据 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作以及取得的研究成果.据我所知， 除文中已经注明所引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果.对本文的 研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 …名:王礼拜 时间: }o]S 年 6 月 12 目 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查|词 。 有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务.有权将学位论文的标题和摘要汇编 出版.保密的学位论文在解密后适用本规定。 …名:王半年 导师签名: 发动  时间: )O lr 年 6 月 12 日 时间: Jo lr 年 6 月 。日 万方数据 万方数据 摘 要 目的：研究急性缺氧(acute hypoxia)对短期分离培养的 SD 乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元 (spiral ganglion neurons, SGNs)钾通道电流的影响。从听觉神经元信息传递功能变化的角 度，为缺氧性内耳损害导致听觉障碍提供进一步的理论依据。 方法: (1) 短期分离培养 SD 乳鼠 SGNs 并鉴定。(2) 应用全细胞膜片钳技术观察急性缺 氧对 SGNs 外向电流的作用。(3) 分别应用不同的通道阻断剂 TEA 和 4-AP 观察急性缺 氧对 SGNs 外向电流的影响。(4) 应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测急性缺氧时与钾通 道相关的胞内第二信使 cAMP 和 cGMP 水平的变化。 结果：(1) 酶解分离可获得生存状态良好的神经元，经免疫荧光鉴定为 SGNs。 (2) SGNs 外向电流为电压门控外向整流电流，主要包括对 TEA 敏感的大电导钙激活钾 通道(Large conductance Ca2+-activated K+ channe，BKCa)电流和对 4-AP 敏感的电压依赖 性钾离子通道(Voltage-gated K+ channels，KV)电流。 (3) 当钳制电压在-60mV 时，急性缺氧电压依赖性地增强 SGNs 外向电流，主要增强 0～ +60 mV 电压区间的激活电流幅度。缺氧致 5min 时，外向电流幅度增强最大，+60mV 电流幅度与对照组基础电流相比由 (971.23 ±50.25) pA 增加到(2361 ± 207.4) pA (n = 6, P 0.01)。缺氧 5-10min 时，增强幅度呈下降趋势。缺氧 11-15min 对外向电流的增强作用 基本消失，与正常对照组相比无统计学差异( n = 6, P 0.05)。 (4) 背景灌流 TEA ( 1 mmol/L)，缺氧引起的 SGNs 外向电流增强作用明显降低，灌流 4-AP ( 1 mmol/L)后，对缺氧引起的 SGNs 外向电流的增强无明显作用。 (5) 分别检测缺氧 5 min，15 min，20 min 后 SGNs 中 cAMP 和 cGMP 的含量变化。缺氧 5 min 组与正常对照组相比，cAMP 浓度明显升高，差异有统计学意义( P 0.01 )。缺氧 15 min 组与正常对照组相比，cAMP 浓度变化无统计学差异( P 0.05 )；缺氧 20 min 组 与正常组相比，cAMP 水平下降( P 0.01 )。cGMP 浓度随着缺氧时间的延长，总体呈下 降趋势( P 0.01)，但在 20 min 后有部分回升( P 0.01，缺氧 15 min vs 缺氧 20 min)。 结论：SD 乳鼠 SGNs 急性缺氧可能通过激活大电导钙激活钾通道(BKCa)，增强 K+外向 电流，使神经元膜电位超极化，细胞兴奋性降低，从而影响 SGNs 传导功能。该变化