急性心肌梗死大鼠自体骨髓干细胞动员的实验研究-心血管内科专业论文.docxVIP

天津医科大学硪士研究生学位论文中文摘要 天津医科大学硪士研究生学位论文 中文摘要 目的： 粒缅胞集落刺激因子(G CSF，Oranulocyte Colony Stimulating Factor) 单用或合用重组人生长激素(rhGH，recombinant human Growth Hormone)动 员急性心肌梗死大鼠自体骨髓干细胞，观察梗死区心肌和血管再生情况。 方法： OWistar大鼠开胸液氮冷冻法制成急性心肌梗死模型。②动物分六组： 单纯动员组(N，舻8)，正常鼠予G-CSF50肛g·kg-1．dd皮下注射，连续5天； 假手术组(so，n=61，开胸不造模无药物干预；梗死组(MI，n=8)，开胸造 模无药物干预；G-CSF组(G，n_8)，造模后一天予G·CSF50I_tg‘kg-1．d1皮 下注射，连续5天；rhGH组(GH，舻8)，造模后一天予rhGH 21U‘kg’1·d。1 皮下注射，连续14天；G．csF+rhGH组(GG，n=8)，造模后一天予G-CSF 501．tg·k91·矿1连续5天，rhGH 21U·kfl·d．1连续14天，均皮下注射。③计 数N组动员前及其后第六天，MI组、G组造模前及其后第六天白细胞 (WBC，White Blood cell)及单个核细胞(MNC，mononuclear cells)g分比。④动 物术后28天处死，除N组外各组处死前10天始予BrdU(5’． Bromo．2．Deoxyuridine，5一溴．2．脱氧尿苷)50mg·kg．1．d～，腹腔注射，连续10 天，处死时称重并取心脏称重，HE染色观察心脏组织病理改变，计算各组 梗死面积及毛细血管密度。⑤除N组外余各组BrdU及cTnI(cardiac Troponon D免疫组化染色，观察心肌细胞和血管再生情况。 结果： (1)造模：46只大鼠，N组8只，SO组6只均存活至28天，另4组共 32只造模后死亡7只(21．875％)，余25只存活至28天。梗死鼠心电图ST 段弓背向上抬高、R波减低、Q波出现，HE染色见与人相似的心肌细胞凝 固性坏死、炎性细胞浸润、纤维组织修复等病理过程。(2)干细胞动员：① 天津医科大学硕士研究生学位论文 天津医科大学硕士研究生学位论文 N组动员后WBC和MNC％(14．85±2．56)×109／工。、(33．19±4．52)％，较动员 前明显增加沪0．05)。②0组动员后WBC和MNC％(16．47±3．00)×10’／L、 (34．46±4．14)％显著高于动员前(PO．05)。③MI组造模后WBC01．49±1．89) ×109／L明显高于造模前(PO．05)，但MNC％(18．22±2．70)％与造模前无差 别(P0．05)。④G组动员后WBC、MNC％显著高于MI组造模后(P0．05)。 (3)①处死时体重和心脏重(g)GH组206．10±13．18、1．2910．12，GG组209．85 ±11．24、1．36±0．12均明显高于SO、MI和G组妒0．05)。②心脏体重比(％) GG组0．647±0．026高于OP组、MI组、G组(P0．05)。(4)实验初至28天 体重差值(g)GH组32．47±9．32、GG组36．80±4．29均明显高于OP组、 MI组、G组(PO．05)。(5)梗死面积(瘢痕长／心脏外周长×％)：除SO组余四 组梗死面积(MI、G、GH、GG)问无差别(尸0．05)，梗死面积18．36±1．34— 20．15±1．91。(6)毛细血管密度(个／o．2mm2)：G组7．6012．04、GH组7．25 ±2．28、GG组9．20±2．28、MI组3．60±1．39、OP组1．02士0．87。其中G、 GH和GG组明显多于MI、OP组，GG组多于G组和GH组，MI组多于 OP组，P值均O．05。(7)免疫组化：G、GH和GG组均可见BrdU(+)的新生 细胞：其中部分新生细胞形成新生毛细血管，G、GG组还可见BrdU(+)和 cTIlI(+1的新生心肌样细胞存在。 结论： ①液氮冷冻法建立大鼠心肌梗死模型可行。②G．CSF可动员正常和心 肌梗死后大鼠自体骨髓干细胞到外周血循环并进入梗死区，使大鼠心肌梗 死区心肌样细胞及毛细血管再生。③rhGH可促进动物生长，增加梗死动物 体重和心脏重，并促进梗死区毛细血管新生，但不再生心肌样细胞。④G．CSF 联合rhGH治疗使大鼠梗死区毛细血管密度、心脏重和心脏／体重比明显增 加，提示两药合用有相加作用。⑤本实验以单个核细胞认定为外周血动员 骨髓干细胞，未做其他鉴定，需进一步研究。 关键词：急性心肌梗死，骨髓干细胞，动员，生长激素，心肌再生， 粒细胞集落刺激因子，血管新生 2 型篷丝壁堑型丝丝ABSTRAC