活动性肺结核病相关细胞因子及其DNA甲基化研究-免疫学专业论文.docxVIP

学校代码： 学校代码： 10023 学 号：$2010035003 硕士学位论文 活动性肺结核病相关细胞因子 及其DNA甲基化研究 所院 中国医学科学院病原生物学研究所 姓名 靳冬冬 指导教师： 刘海鹰副研究员 导师小组： 刘海鹰、于杨、郗雪艳 学科专业： 免疫学 研究方向： 感染性疾病的免疫特征研究 完成日期： 2013．06 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 硕士学位论文 眠摘要 黑 一T Zd一』螂㈣艮1 BD25 11 缩略词表 ．4 引言 ．S 一、肺结核病与机体免疫应答能力密切相关 ．5 二、细胞因子在肺结核病的发生发展中发挥重要作用 ．7 三、表观遗传学对免疫相关基因和蛋白的表达调控 10 四、DNA甲基化可通过调节免疫系统相关基因影响疾病的发生发展 ．12 正文 15 第一部分 15 活动性肺结核病人外周血细胞因子谱的检测 15 1．1实验材料和方法 ．15 1．2实验结果 20 第二部分 26 肺结核病人基因组DNA及候选因子甲基化状态检测 26 2．1实验材料和方法 ．26 2．2实验结果 ．33 讨{仑 一42 一、肺结核病人外周血中细胞因子变化特征 42 二、细胞因子的动态变化对指示结核病发病具有重要的意义 43 三、肺结核病人的低甲基化状态可能与其免疫反应的增强相关 ．43 四、候选因子启动子甲基化水平可能影响其表达 44 参考文献 46 附录1 54 致谢 55 独创性声明和学位论文版权使用授权 56 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 硕士学位论文 肺结核病(pulmonary tuberculosis，PTB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，M．tb)引起的一种与机体细胞免疫应答密切相关的慢性感染性疾病。 活化的T淋巴细胞及其分泌的细胞因子在感染和疾病的发生、发展中发挥重要作用。 为进一步了解活动性肺结核病相关细胞因子的变化，本课题检测了肺结核病人 和结核分枝杆菌潜伏感染者血浆中细胞因子表达水平的差异，并且随访观察了肺结 核病人密切接触者外周血细胞因子谱的动态变化。结果显示：肺结核病人血浆中 CXCLl2、CCLl及TNF．a等一组细胞因子相对于健康对照和潜伏感染者都有显著 的升高；随访队列中发病的患者外周血中CXCLl2和抗原特异性IF．y表达水平随 疾病的发生而显著升高。 随之，我们进一步了解细胞因子显著性差异表达是否与基因组DNA甲基化水 平有密切关系。利用全基因组DNA甲基化芯片的方法，我们比较了健康对照和活 动性肺结核病人基因组甲基化状态。芯片结果显示：活动性肺结核病人较健康对照 呈现显著性低甲基化状态，在1，370个差异性基因中有90．40／0的基因(1，234个) 甲基化程度降低。GO分析显示甲基化程度存在差异的基因参与了炎症反应、B细 胞分化等多种免疫相关功能。此结果表明宿主基因的低甲基化状态可能是活动性肺 结核病人的特征之一。前期实验表明CXCLl2的表达水平与肺结核病密切相关。因 此，我们同时利用硫化测序法检测了健康对照和病人cxcll2基因启动子区域的甲基 化率。结果表明：活动性肺结核病人cxcll2基因转录起始点上游．194bp位点甲基化 率较正常人有显著性下降，并且与患者外周血CXCLl2蛋白表达水平呈明显负相关。 综上所述，肺结核病患者外周血中一组细胞因子的表达存在显著性增加，其 与潜伏感染者和正常人均存在显著性差异。利用全基因组DNA甲基化芯片分析发 现，宿主基因低甲基化状态是结核病患者的显著特征，其可能与患者异常的免疫反 应和细胞因子表达水平升高有关。本论文为深入了解结核病的免疫保护和免疫病理 机制提供了新的理论数据。 关键词：肺结核病，细胞因子，DNA甲基化，甲基化芯片，CXCLl2 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 中国医学科学院北京协和医学院 硕士学位论文 Abstract Pulmonary tuberculosis(PTB)is a cllromc inflammatory disease caused by Mycobacterium tuberculosis僦tb)．M．tb infection can be controlled life—long in most infected individuals，however,a minority of cases(5～10％)could develop to ac