化妆品微生物学检验方法汇编.doc

第 PAGE 2 页 共 NUMPAGES 7 页 化妆品检验方法细菌总数的测定 1方法提要 细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌数量。化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃ 本标准采用标准平板计数法。 2 培养基和试剂的配制 2.1生理盐水 称取8.5克氯化钠加入1000毫升纯水溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90毫升，121℃（15 2.2卵磷脂、吐温-80营养琼脂培养基 按成品培养基用法说明配制。 仪器 3.1 锥形瓶 3.2 量筒 3.3 高压消毒锅 3.4 试管 3.5 灭菌平皿 3.6 灭菌刻度吸管：10mL、2mL、1mL 3.7 酒精灯 3.8 恒温培养箱 3.9 显微镜 3.10 pH计 4 操作步骤 4.1 用灭菌吸管取1：10稀释的检样2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL，如样品含菌量高，还可再稀释成1：1000，1：10000等，每种稀释度应更换1支吸管。 4.2 将融化并冷却至45-50℃的卵磷脂、吐温-80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15mL，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后翻转平皿，置37 5 菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5~10的放大镜检查，以防遗漏，记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落数乘以2，以代表全皿菌落数。 6 菌落计数及报告方法 6.1 首先选取平均菌落数在30~300之间的平皿，作为菌落总数测定范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘以其稀释倍数。 6.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30~300之间，则应求出两者菌落数比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数。 6.3 若所有稀释度的平均数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍 数报告之。 6.4 若所有稀释度的平均数均小于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 6.5 若所有的稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 6.6 若所有稀释度均无菌落生长，报告数为每克或每毫升小于10。 6.7 菌落计数报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数表示。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。 化妆品检验方法霉菌的测定 1 方法提要 霉菌的测定是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1ml化妆品中所污染的活的霉菌数量，以判明化妆品被霉菌污染程度及其一般卫生状况。 本方法根据霉菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置于28℃ 2 培养基和试剂的配制 2.1 生理盐水 称取8.5克氯化钠加入1000毫升纯水溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90毫升，121℃（15 2.2 虎红培养基 按成品培养基用法说明配制。 3 仪器 3.1 锥形瓶 3.2 量筒 3.3 高压消毒锅 3.4 试管 3.5 灭菌平皿 3.6 灭菌刻度吸管：10mL、2mL、1mL 3.7 酒精灯 3.8 恒温培养箱 3.9 显微镜 3.10 pH计 4 操作步骤 4.1 用灭菌吸管取1：10稀释的检样2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL，如样品含菌量高，还可再稀释成1：1000，1：10000等，每种稀释度应更换1支吸管。 4.2 将融化并冷却至45-50℃的虎红培养基倾注平皿内，每皿约15mL，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待虎红培养基凝固后翻转平皿，置25~28 5 菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5~10的