鸡IGFⅡ基因与GRB10基因印记状况的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

中国农业大学博士学位论文摘要 中国农业大学博士学位论文 摘要 IGF2基因、GRBl0基冈是哺乳动物的印记基因，本研究通过检测等位基因表达考察鸡的 IGF2基因、GRBl0基因的印记状况。类胰岛素生长因子-II(IGF2)是一种促有丝分裂多肽类激 素。利用PcR—SSCP方法在一个鸟鸡家系父母代对IGF—II基因多态性进行检测。在该基因外显 子1、外显子2中发现多态位点，这两个位点早连锁遗传。测序结果显示外显子l的第72(自第 一霄码子开始)何碱基有C／G突变。分别选取1日龄、90日龄杂合子×纯台子后代与纯合子× 杂合子后代，检测IGF2在这两位点的基因型。对于确定为杂合予的后代，重新设计一对包含突 变能点、并跨内含子2的引物，取同日龄纯合子个体作对照，利用RT．PCR．SSCP检测1日龄乌 鸡J}{=脏，90日龄鸟鸡肝脏、肌肉、心脏、肾脏组织中等使基因表达状况。结果显示，鸡的]GF2 基冈两个等位基冈均等表达，表明鸡的IGF2基因不受印记控制。 GRBl0基因在体内与胰岛素受体、类胰岛素I型受体结合，抑制相应激素与受体的结合。 尽管哺乳类GRBl0蛋白研究很多，但是目前，鸡的GRBl0基因尚无报道。本研究通过对cDNA 文J牢中一个包含GRBl0基闳的克隆测序，得到鸡的GRBl0基因的3。端序列。利用5’RACE 方法，兜隆得到r鸡的GRBl0基因的全部编码区序列、3’非翻译区与部分5’非翻译区。GRBl0 基因的编码区包含l?91bp的DNA序列，鸡与人和小鼠核营酸序列同源性分别为78％和05％。外显 子结构上，鸡与小鼠的编码暖结构相似：在第4、5外显子之阃含～个75bp的可变剪接(编码 25个氮基酸残基)，而且，较K=的剪接体不是常见的存在形式。鸡的GRBIO基因编码596个氨 基酸的多肽，与A GRBlO蛋白的氮基酸同源性为81％，鸡与小鼠氨基酸同源性为64％。 利用直接测序方法对鸡GRBIO基因的eDNA在6只明星鸡与6只丝毛乌骨鸡进行多态性分 析·结果显示-在cDNA多态性分析共发现4个SNP位点，在编码区2736p、421bp、848bp 二个能点，发现都存在A／G突变；在编码区966bp，发现C／T突变，这些突变共同的特点是都 位于密码予第三位。由于密码子的简并性。这些SNP都没有引起编码的氨基酸的改变，属于同 义突变。 GRBl0基因是哺乳动物的一种印记基因。鸡GRBl0基因cDNA的测序分析显示，在多个 位点‘_个体中，测序皇I!j袋表现为位点杂台，这表明两个等位基因同时表达，鸡的GRBIO基因与 它在哺乳类同源基吲不同，不受印记控制。 关键词：鸡，骜刚细印记，1GFll。GRBl0．SNP !!!!!!!!!!!E!!!E!!!!￡§E!s，gs!!!!!!!!Sg!!!_Ej!!!E!j日2E!口 !!!!!!!!!!!E!!!E!!!!￡§E!s，gs!!!!!!!!Sg!!!_Ej!!!E!j日2E!口。。。—。型呈窒呈罂型型些些墼坠一，。。，，—。。一 Abstract IGF2(Insulin-Like Growth FactorII，IGF-II)gene is a growth factor mainly expressed in fetus， but it influences growth performance after birth in livestock,and this gene was subjected to imprinting in mammals．In this research，we study i乜imprinting status in chicken．We detected polymorphisms in IGF2 in a silky family by PCR-SSCP．A G—_’A mutation WaS detected in exonl(at position 72)and a C—·G mutation was detected in exon2(at position 131)by sequencing．Progeny from heterozygote x homozygot[e reciprocal cross were assayed for expression．The transcription of IGF2 Was detected by RT-PCR-SSCP．IGF2 gene Was expressed bialleleieally in 1-day-old neonatal liver and 90-day—old liver, muscle，heart，and kidney of both heterozygote