脊髓星形胶质细胞缝隙连接蛋白43参与慢性神经痛调制的实验研究-麻醉学专业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 博士毕业论文 英文缩略词 缩写 英文全称 中文全称 CCI chronic constrictive injury 慢性结扎损伤 Cx43 cormexin43 缝隙连接蛋白43 GFAP 酉埘fibrillary acid protein 胶质原纤维酸性蛋白 P、^叮L paw withdrawal thermal latency 后肢热刺激回缩潜伏期 PⅥ7ET paw withdrawal electric threshold 电刺激回缩阈值 R量PCR reverse transcription followed by 逆转录聚合酶链式反应 polymerase chain reaction CBX carbenoxolone 甘珀酸 瓣801 5-methyl-10，11·dihydro一5H-dibenzo(a， 5．甲基二氢丙环庚烯亚 d)cyclohepten-5，10-imine maleate， 胺马来酸 dizoeipine maleate GJIC gap junctional intercellular 缝隙连接细胞间通讯 colnl]flunication ICW intercellular Ca2+waves 细胞间钙波 NMDA N-methyl-D-aspartate N．甲基一D．门冬氨酸 EAA exicitory amino acid 兴奋性氨基酸 U阳 long term potentiation 长时程增强 E气GE polyacrylamide gel dectrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 rpm(r／min) revolutions per minute 每分钟转数 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 0D optical density 光密度 1E Tris／EDllA bu￡fbr Tris／EDl’A缓冲液 华中科技犬学同挤医学院 华中科技犬学同挤医学院 博士毕业论文 脊髓星形胶质细胞缝隙连接蛋白43 参与慢性神经痛调制的实验研究 博士研究生：许学兵 博士生导师： 姚尚龙教授 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉学教研室 武汉 430030 中文摘要 第一部分 慢性神经痛大鼠脊髓星形胶质细胞缝隙连接蛋白43的表达 目的通过坐骨神经结扎损伤(CCI)模型研究慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质 细胞缝隙连接蛋白43(Connexin43，Cx43)表达的变化。 方法3～4周龄SD大鼠38只随机分配到两组，分别接受右坐骨神经结扎手术 (CCI组)和假手术(Sham组，暴露分离坐骨神经，但未行结扎)。手术前1d 以及手术后1d，3d，5d，7d，14d(分别记为dO、d1、d3、d5、d7、d14)，观察 大鼠疼痛行为学变化并测定后肢热刺激回缩潜伏期(PWTL)、电刺激回缩阚值 fPWET)的变化；于d14取大鼠L4．5右侧脊髓采用免疫组化分析Cx43和胶质原纤 维酸性蛋白(eJial fibdllary acid protein，GFAP)表达的变化，并以B．肌动蛋白 (B—actin)为内参照基因，采用逆转录多聚酶链反应(RT_PcR)半定量分析CCI 组和Sham组大鼠k-5脊髓Cx43、GFAPmRIgA表达的差异。 结果手术后第7天，Sham组大鼠行走步态恢复正常，而CCI组大鼠术后一直表 现为踱行、不能负重等行走步态异常。与do比较，CCI缎术后右后肢PWTL、PWET 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 博士毕业论文 明显降低(PO．01)，Sham组d1、d3、d5轻度降低，d7后恢复至术前基础水平 (PO．05)：组间同时点比较CCI组降低程度明显大于Sham组。观察期内，两组 大鼠手术前后左后肢PWTL、PWET无明显改变。术后d14免疫组化显示CCI组 脊髓背角星形胶质细胞与Sham组相比呈现为明显活化状态，胞体大，突起多而粗 大。CCI组和Sham组L4．5脊髓右侧背角GFAP阳性染色面积分别占(29±7)％和 (19±5)％(PO．01)；Cx43阳性染色面积分别占(17±3)％和(4±1)％(PO．01)； CCI组阳性染色增多主要集中在脊髓I—III层。Sham组脊髓1．4．5Cx43扩增产物量 极少，而CCI组既43扩增产物量约为Sham组3．O倍；CCI组GFAP扩增产物量 约为Sham组的1．35倍。 结论慢性神经痛大鼠脊髓背角星形胶质细胞Cx43蛋白及mRNA表达增加，其 中脊髓背角浅层Cx43蛋白表达增加最为显著，且Cx43与GFAP表达变化相一致， 提示星形胶质细胞缝隙连接可能在神经痛的形成和维持中起重要作用。 【关键词】慢性神经