甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981凋亡和体外侵袭的影响及分子机制分析-临床医学(肿瘤内科)专业论文.docx

声 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注 和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研 究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下 取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。 孵骨丁 洼 洁 导 师 ／亥 坞了 肋c、 “ 月 觳舫铂 四JI 四JI J大学临床医学七年制硕士学位论文 硕-J=6JF究生刘洁截 甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 凋亡和体外侵袭的影晌及分子机制研究 硕士研究生：刘洁薇 导 师：周清华教授 摘要 背景与目的肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人类健康和生 命威胁最大的恶性肿瘤。近20年来，虽然肺癌的基础研究和临床诊断治 疗均取得了明显进步，但是肺癌总的治愈率仍然只有15％左右 。因此， 研究和开发新的抗肺癌药物，尤其是疗效好，毒副作用低的抗肺癌药物 已成为肺癌研究领域的重要课题。硒作为一种人体必需的微量元素和天 然的防癌抑癌制剂，越来越受到肿瘤学界的关注。甲基硒酸作为一种新 型的人工合成的硒化合物，以其广泛的抗癌效应和无需体内代谢酶转化 而直接作用于靶细胞的特性成为最具潜力的硒化合物抗癌制剂。已有的 研究表明，甲基硒酸对于包括前列腺癌、乳腺癌等多系统肿瘤均有体外 增殖抑制作用，其抗癌机制包括阻滞细胞周期，诱导凋亡，抗血管生成， 以及抑制肿瘤细胞侵袭转移等作用。迄今，有关甲基硒酸对肺癌是否具 有与其他恶性肿瘤相同或相似的抗癌作用，国内外均无报道。本研究旨 在探讨MSA对于人高转移大细胞肺癌细胞株L9981是否具有生长抑制 和逆转体外侵袭能力的作用，并试对其分子机制作初步探讨。 四川大学临床医学七年制硕士学位论文 四川大学临床医学七年制硕士学位论文 硕士研究生刘洁薇 方法应用体外培养技术，以甲基硒酸(MSA)作用于人高转移大 细胞肺癌细胞株L9981，以台盼蓝计数法绘制细胞生长曲线并计算群体 倍增时间：以Boyden小室体外侵袭实验检测MSA作用于L9981细胞株 前后体外侵袭力的变化；以流式细胞术检测MSA作用于L9981细胞株 前后凋亡百分率的变化，并测定MSA作用于L998l肺癌细胞株前后凋 亡相关基因，以及侵袭转移相关基因表达水平的变化。 结果本研究在国内外首次观察到：(1)MSA对人高转移大细胞 肺癌细胞株L9981的体外增殖能力具有明显的抑制作用，并具有明显剂 量依赖性；(2)低浓度MSA对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981体外 增殖能力的抑制效率低于阳性药物组DDP(2．59∥m1)，但较高浓度 (5．Opmol／L和7．59mol／L)MSA对L9981细胞株体外增殖能力的抑制作 用与DDP(2 599／m1)比较无显著性差异(P0．05)；(3)5．09mol／L和 7．5p．mol／L MSA均能显著延长L9981肺癌细胞株的群体倍增时间：(4) MSA能明显诱导肺癌细胞株L998l细胞凋亡，并具有剂量和时间依赖性： (5)MSA能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L998 l凋亡相关基因 Fas，FasL，Bax的表达水平；(6)5 Opmol／LMSA能显著抑制或／和逆转人 高转移大细胞肺癌细胞株L998l的体外侵袭能力，MSA逆转L998l体外 侵袭能力的作用显著高于2．5 pg／ml DDP的作用(P=O．000)：(7) 5．09mol／L的MSA能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中侵袭 转移相关基因E．Cd，Endostatin， MMP．2和VEGF表达水平，2．5“g／ml 的DDP处理L9981肺癌细胞株仅使MMP．2表达水平显著下调，而对 E．Cd，Endostatin和VEGF表达水平无明显影响。 结论 (1)MSA对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外增 殖具有明显的抑制作用，并具有剂量依赖性，且5．0pmol／L(O．7999／m1) 四川大学J临床医学七年制硕士学位论文 四川大学J临床医学七年制硕士学位论文 预一l：il；f究生刘清蔽 对L998l体外增殖的抑制效率与2 5Hg／ml DDP的抑制作用等效：(2) MSA能诱导L9981肺癌细胞株凋亡，并具有剂量和时间依赖性；(3) MSA能抑制或／和逆转L9981肺癌细胞株的体外侵袭能力，且5．Ogmol／L (0．79”g／m1)MSA抑制L9981体外侵袭力的作用显著强于2．51ag／ml DDP 的作用：(4)MSA抑制L9981体外增殖，诱导凋亡和逆转其体外侵袭能 力的作用可能与MSA显著上调L9981肺