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免疫组化实验技术;概述; 通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性抗体(单克隆或多克隆)检测组织、细胞内相应的抗原物质，形成抗原 - 抗体复合物；此复合物上带有事先标记的标记物，通过与标记物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的。
抗原抗体结合反应
蛋白水平;;1. 高度的特异性
2. 敏感性高
3. 方法步骤统一
若掌握一种技术操作方法步骤，则一通百通
4. 形态、机能和代谢密切结合
;抗原修复;?化学方法(酶消化方法)
胰蛋白酶(trypsin) ：浓度一般为0.05%~0.1%, 胃蛋白酶(pepsin): 0.4%胃蛋白酶
链霉蛋白酶(poruse): 浓度为0.1%。
;?物理方法 单纯加热方法; 高压加热方法; 微波方法;免疫组化实验方法;步骤;直接滴加第一抗体；
PBS冲洗；
滴加生物素化的二抗；
PBS冲洗；
滴加ABC/SP复合物；
PBS冲洗；
DAB显色。;BenchMark? XT 产品介绍 ——全球领先的全自动 IHC/ISH 检测平台; 脱蜡 ;免疫组化结果判定;免疫组织化学染色中的非特异性着色;在滴加一抗前，采用非免疫动物血清封闭组织中的带电集团，避免与第一抗体的非特异性结合。
阻断内源性酶。如3%的H2O2等。
增加第一抗体的稀释度
调整孵育时间及反应温度
避免染色过程中标本干枯等方法。 ;染好切片的关键;免疫组织化学的应用;(一)提高病理诊断的准确性;1、激素受体及生长因子的检测在预后及治疗方面的应用;2、癌基因蛋白表达的临床及预后方面研究应用;cerbB-2
浸润性乳腺癌表达患者预后差。
恶性度高者阳性率高。
卵巢癌中阳性率为30%，阳性者预后差。;c-myc
作用于核内DNA的癌基因，可剌激DNA的合成。
c-myc的过度表达则促进肿瘤的生长和发展，因而肿瘤的侵袭性增加。
在对宫颈癌、小细胞肺癌的研究中已证实，c-myc表达增加者存活期缩短。;ras
p21是一种ras癌基因蛋白
肝细胞癌、大肠癌中表达增高，
在卵巢癌亦有过度表达的报道。
对于其预后意义则仍争议。;3、对肿瘤细胞增生程度的评价;4、发现微小转移灶;5、指导肿瘤的治疗;6、在肿瘤病理学的??究和诊断中的其他应用;(四)病原微生物的检查
;免疫组化学染色图片举例;DLBCL CD20;冰冻对免疫组化染色效果的影响;组织固定对免疫组化染色结果的影响;未来的病理学实验室 ;谢 谢！ Thank you！
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