选修三基因工程的基本操作程序专题探讨.pptVIP

* P11－寻根问底 2.将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 提示：有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。 * * * * * * 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 启动子 基因（目的）的首端，有特殊结构的DNA片断，RNA聚合酶识别和结合的部位 启动子决定了双链的模板链 终止子 基因（目的）的尾端，转录终止信号 标记基因 为了鉴别受体细胞中是否含目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 * 由RNA聚合酶所催化的转录 RNA聚合酶识别启动子 RNA聚合酶与启动子结合 RNA合成开始 RNA转录到终止子 RNA聚合酶从模板链上脱落 2006/5/16 * * 三、将目的基因导入受体细胞 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程 方法 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 * ⒈将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法（单子叶植物） 花粉管通道法 * 农杆菌的特点 双子叶植物和裸子植物受伤时，伤口分泌酚类吸引农杆菌 农杆菌移向植物细胞伤口处 农杆菌的Ti质粒上的T-DNA整合到植物细胞染色体的DNA上 2006/5/16 * 农杆菌转化法 转入 农杆菌 * 双子叶植物和裸子植物受伤时，伤口分泌酚类吸引农杆菌 带有目的基因的农杆菌Ti质粒转移至受体细胞 目的基因得以稳定维持和表达 目的基因插入到植物细胞染色体的DNA上 * 基因枪法（微弹轰击法） 利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 单子叶植物，成本高 * 花粉管通道法 在植物授粉后，花粉形成的花粉管还没愈合前，剪去柱头，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 转基因抗虫棉 简便经济 * ⒉将目的基因导入动物细胞-显微注射法 显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注 射到受精卵中 * ⒉将目的基因导入动物细胞-显微注射法 将含有目的基因的表达载体提纯，DNA 1~3μg／mL 从雌性动物取出卵（体内或体外受精） 显微注射 含目的基因的受精卵，移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育 * ⒊将目的基因导入微生物细胞 原核生物（大肠杆菌） 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 * ⒊将目的基因导入微生物细胞 用Ca2＋处理细菌 感受态细胞：增大细胞壁的通透性，吸收周围环境中DNA分子 重组表达载体DNA溶于缓冲液与感受态细胞混合 在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子 * 本堂课作业： 下发资料1.1~1.2 核心考点、双基考题部分 国庆作业： 下发资料：高考题 * 四、目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术 检测目的基因是否转录出了mRNA 分子杂交技术 检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗原－抗体杂交 分子水平的检测 * ⒈检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术 探针 含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记 转基因生物的基因组DNA 待测 若出现杂交带，表明目的基因已插入染色体的DNA中 * 2.检测目的基因是否转录出了mRNA 分子杂交技术 探针 含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记 从转基因生物中提取mRNA 待测 若出现杂交带，表明目的基因已转录出mRNA * 3.检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交 若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品 * 4.个体生物学水平的鉴定 抗虫或抗病的接种实验，以确定是否具有抗性以及抗性的程度 有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较，以确定转基因产品的功能活性是否与天然产品相同 2006/5/16 * DNA探针 将双链DNA解开 用同位素、荧光分子或化学发光剂等对DNA单链进行标记 抽取病人的组织或体液，将DNA分离出来 使DNA解旋 查出疾病 将DNA探针引入到化验样品中 分析遗留在样品中的DNA探针 * 利用基因的特性破案 * 生物材料 DNA mRNA 限制酶切割 一定大小范围DNA 基因组文库 PCR 反转录 cDNA cDNA文库 获取目的基因 人工合成 * P15－1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 答：不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： 生物之间进行基因交流