济南地区不同水体中环境激素含量测定及生物学效应研究-细胞生物学专业论文.docxVIP

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独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果,也不包含为获得 (注:如没有其他需要特别声明的,本 栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 导师签字: 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本学位论文作者完全了解 学校 有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权 学校 可 以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签字: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 山东师范大学硕士学位论文 目 录 中文摘要 I Abstract III 缩写词 V 综述 1 正文 13 第一章 环境水样中类雌激素总体效应的测定 13 1.1 前言 13 1.2 实验材料 13 1.3 实验方法 14 1.4 实验结果 16 1.5 讨论 18 第二章 环境水样中 5 种雌激素含量的测定 20 2.1 前言 20 2.2 实验材料 20 2.3 实验方法 20 2.4 实验结果 22 2.5 讨论 29 第三章 雌酮对于斑马鱼内分泌干扰效应的研究 30 3.1 前言 30 3.2 实验材料 30 3.3 实验方法 31 3.4 实验结果 37 3.5 讨论 40 第四章 污水处理厂水样对斑马鱼内分泌干扰效应的研究 42 4.1 前言 42 4.2 实验材料 42 4.3 实验方法 42 4.4 实验结果 43 4.5 讨论 45 结论 46 参考文献 47 致谢 53 攻读硕士学位期间发表文章 54 i 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE IV 济南地区不同水体中环境激素含量测定及生物学效应研究 中文摘要 环境激素类物质广泛存在于我们生存的环境中,对人类和其他生物的生存造 成严重威胁。本研究首先采用重组基因酵母的方法初步检测济南地区不同水体 (包括污水(污水处理厂进水,厌氧池,生物反应池,1A 级出水,2 级出水); 医院出水(省中医,妇幼保健院);其他水样(黄冈上,黄冈下,玉清湖,东平干 渠,睦里庄,彭庄))中雌激素总体含量。由于重组基因酵母的方法灵敏性不高, 重复性不好,进而采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)的方法测定这些水体 中 5 种代表性雌激素的含量(雌酮(E1), 雌二醇(E2),雌三醇(E3),乙炔基雌二 醇(EE2),己烯雌酚(DES))。通过之前雌激素含量测定的结果得知污水处理厂所 采水样中仍残留较高浓度的环境激素,进而选用斑马鱼作为实验对象进行生物学 效应研究,采用 real-time PCR 的方法研究不同浓度雌酮及污水对成年雄性斑马 鱼内分泌相关基因表达变化情况的影响(vtg,esr)。具体实验结果如下: 首先采用重组基因酵母法检测所采全部水样中雌激素总体含量。在所有水样 中,能检测到雌激素活性的有妇幼保健院和省中医出水,河流湖泊及排污口上下 游水样均未检测出雌激素活性,而污水处理厂水样中厌氧池,生物反应池,1A 级出水,2 级出水未检出,但污水处理厂进水水样中毒性太高,导致酵母死亡, 无法测定其雌激素含量。 由于重组基因酵母法灵敏度低,重复性差,进而采用高效液相色谱-质谱联 用的方法(HPLC-MS法)检测水体中5种雌激素含量(雌酮(E1) ,雌二醇(E2), 雌三醇(E3),乙炔基雌二醇(EE2),己烯雌酚(DES)),污水处理厂按处理流程各 级水样中5种雌激素含量基本不发生变化,雌酮含量较高(约10ng/L)。医院出 水(妇幼保健院,省中医)中各种雌激素含量也很高(尤其是雌二醇,雌酮,己 烯雌酚),远高于其他河流及污水处理厂水样。污水处理厂排污口上游和下游中 雌激素残留也较高(雌酮含量约10ng/L)。 在检测了所采水样中雌激素含量之后,初步明确环境水样中雌激素污染程 度,在此基础上进而研究其生物学效应,从而探讨环境雌激素对实验动物乃至对 人类可能造成的危害。雌酮作为标准对照,首先研究成年雄性斑马鱼在雌酮中的 内分泌干扰效应,采用real-time PCR的方法研究雌酮对斑马鱼肝脏中vtg及esr基 因表达变化情况的影响。然后将成年雄性斑马鱼分别在污水处理厂进水,2级出 水,1A级出水水样中暴露15天进行real-t

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