分子生物学课件-2-DNA的复制.ppt

2.3 DNA的复制 染色质复制不包括任何延长期，此期间DNA与组蛋白分离。一旦DNA被复制，在两条复制链上核小体都很快形成。DNA复制也包含核小体颗粒的复制。 当染色质重建时，已经与核小体结合的DNA 展开使两子链复制。那么，此位点上原来存在的核小体如何变化呢？组蛋白八聚体是解离成自由组蛋白重复使用，还是保持组装状态呢？ 原组蛋白八聚体没有被保留。解聚与重组的方式远不清楚。 核小体在DNA 上的位置有特异性吗？现在已经清楚，组蛋白八聚体在DNA 上组装并不是与序列无关的随机结合，有些情况下模式通过内部途径实现，定位取决于DNA 的结构特征；有些情况下模式通过外部途径达成，定位取决于其它蛋白质与DNA 或/和组蛋白的相互作用。 2.3.1 DNA的半保留复制 上述实验证明新合成的DNA同时含有15N和14N，因此DNA的复制不可能是全保留复制。 为了证明DNA复制不是分散复制， Meselson and Stahl 进行了进一步的实验，他们将15N标记的细菌在14N培养基上保持一代，然后提取DNA，加热到100度，使DNA双链变性为单链，再对变性的单链进行CsCl梯度密度超速离心，发现了两条分开的条带，表明一条链是15N标记的，另一条链是14N标记的，因此DNA复制是半保留复制，而不是分散复制。 DNA半保留复制的生物学意义: DNA replication by semi-conservation makes the two daughter duplexes have the same sequence as the parental duplex. Thus,genetic message of organism keeps relative stable. DNA is much more stable than other components in cell. This is consisted with its function——carrier of genetic message. DNA的复制是由固定的起始点开始的（固定的序列），并识别参与复制起始的特殊蛋白； 复制叉以DNA分子上某一特定序列为起点，移动的方向和速度多种多样，但以双向等速方式为主。 2.3.3 复制的几种主要方式 2.4 原核生物和真核生物 DNA复制的特点 2.4.1 原核生物DNA复制的特点 1.1 解旋酶（helicase) DNA复制时，解旋酶利用ATP的能量启动DNA解旋，使双连分开形成单链。 在Ecoli中，解旋酶DnaB作为引发体的成员，参与复制叉形成，并结合于一个复制叉，利用ATP水解的能量解开双螺旋，推动复制叉向前延伸; 大部分DNA解链酶可沿后随链的5’-3‘方向随着复制叉的前进而移动，Rep蛋白则沿前导链模板的3’-5‘方向移动。 生物体内的解旋酶有多种，有些解旋酶还参与DNA修复，重组等非复制过程。 1.2 拓扑异构酶（topoisomerase) 可以使DNA的两种拓扑异构体互变的酶。 DNA分子在细胞内以超螺旋形式存在， DNA拓扑异构酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间转变。 功能：与DNA形成共价结合中间体，使DNA磷酸二酯键断裂，形成DNA nick ，DNA的一条链进行解旋旋转而改变DNA分子的拓扑状态。 v 参与复制、转录、重组。 效应：拓扑异构酶可使DNA发生： 连环化（catenate) 脱连环化(decatenate) 打结（knot) 解结（unknot) 解旋酶沿着复制叉向前延伸产生了一段单链，细胞内大量的单链结合蛋白能和单链DNA结合，防止其重新配对形成双链。 SSB的作用： v 使DNA单链保持一种伸展构象，它们与磷酸骨架结合，离开暴露的碱基，此次那些碱基能作为DNA合成的模板； v 使解开的单链不形成发卡结构； v 保护DNA单链不受Dnase水解。 起始蛋白与ＤＮＡ特异序列结合、促进解旋和引发体组装 4.3.4 引发酶（Primase，或引物酶) 引物的意义： 引物酶催化引物RNA的合成，但它不同于RNA聚合酶。 引物酶只在复制起点处合成RNA引物以引发DNA复制，而RNA聚合酶则是启动DNA转录合成RNA ，从而将遗传信息由DNA传递到RNA。 ①　DnaA protein molecules binds to the four 9 bp repeats in the origin，then recognizes and successively denatures the DNA in the region of the three 13 bp repeats, which are rich