生物技术制 药-课件第四章内容资料.ppt

第四章 动物细胞制药 ;③细胞的早期体外培养实验：19世纪末至20世纪初，1885年~1907年，用生理盐水培养鸡胚组织，用血清和血浆培养血液中和结缔组织中的细胞，用淋巴液培养蛙神经组织中的细胞。 ;④组织培养和细胞培养：20世纪20年代~70年代，利用细胞培养生产疫苗，利用血清和血浆体外培养动物细胞，使用培养基体外无菌条件下培养细胞。 ⑤细胞工程学：20世纪80年代至今。;二、组织培养或细胞培养 将组织或细胞从机体取出，在体外模拟机体体内的生理条件进行培养，使之生存和生长，以获得生物体株系或从中制备目的产物。 ;2、细胞工程学的研究内容 ①真核生物的基因重组、导入、扩增和表达的理论和技术； ②细胞融合的理论和技术； ③细胞器移植的理论的技术； ④染色体改造的理论和技术； ⑤转基因动、植物特性研究的理论和技术； ⑥细胞大规模培养的??论和技术； ⑦目的产物提取纯化的理论和技术;四、动物细胞在生物制药领域中的应用 细胞虽小，但组成结构精密、复杂，有着巨大的生产效率，可生产许多维持机体生命所需的产物。 许多基因产物不能在原核细胞内表达，需要经真核细胞所特有的翻译后修饰，以及正确的切割、折叠后，才能形成与自然分子一样的功能和抗原性。 ;因此，动物细胞成为基因工程重要的宿主细胞，以生产多种非常重要的生物制品。 （1）利用动物细胞培养病毒来生产疫苗：包括乙肝疫苗、乙脑疫苗、脊髓灰质炎疫苗、狂犬疫苗等。 （2）淋巴因子：α、β和γ干扰素，1、2和6白细胞介素。 （3）酶原激活剂：纤维蛋白溶酶原激活剂（ProUK），组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）等。 ;（4）单克隆抗体：McAb （5）红细胞生成素：EPO （6）其它：第8因子、肿瘤坏死因子（TNF）、蛋白C、粒细胞克隆刺激因子（G-CSF）、上皮生长因子（EGF）及SOD等。 ;第二节 动物细胞的形态和生理特点 ;（二）动物细胞的形态 动物细胞不是靠一个细胞包办一切生理活动，各种细胞有明确的分工，相应有不同的形态。这种随功能不同所产生的形态变化称分化。 ①肌肉细胞成纺缍形，起收缩伸展的作用。 ②神经细胞细长并有很长的分支和纤维，便于接受和传递刺激。 ;③红细胞呈圆盘状，使与外界的接触面相对增大，有利于与周围环境交换气体和在血管内流动。 ④上皮细胞相互挤压成不规则的立方形、锤形等。 但这些分化的形态，当细胞离体培养时经常会发生变化。 ;（三）离体培养细胞的形态 1、贴壁细胞（贴壁依赖型）anchorage dependent: 这类细胞生长必须有给以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基提供的贴附因子才能在该表面上生长繁殖。 当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态。 ;①纤维样细胞型 主要来源于中胚层组织的细胞（成纤维细胞、心肌细胞、平滑肌细胞或成骨细胞等）。 离体培养时，细胞呈梭形或不规则的三角形，细胞群常连接成网，生长时呈放射状、漩涡状或火焰状。 ;②上皮样细胞型 主要来源于外胚层和内胚层组织的细胞，如皮肤、肠管和肺泡上皮细胞等。 贴壁培养时，细胞呈扁平的不规则的多角形，生长时彼此紧密连接成单层细胞片。 上述形态不是绝对的，会随着培养条件的变化而有所变化。 ;2、悬浮细胞（非贴壁依赖型）anchorage independent 生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状态生长，常呈圆形。如血液内的淋巴细胞和产生干扰素的Namalwa细胞等。 ;3、兼性贴壁细胞 有些细胞并不严格地依赖支持物，即可以贴附于支持物表面生长，还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长，这类细胞称兼性贴壁细胞。 在贴壁生长时呈上皮样或纤维样细胞的形态，而悬浮生长时呈圆形。如：中国地鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞等。 ;二、动物细胞的生理特点 动物细胞的培养与微生物和植物细胞的培养有很大不同，这是由动物细胞的生理和生长特点决定的。 1、细胞分裂周期长 动物细胞分裂所需时间一般为12~48h。不仅随细胞种属的不同而不同，同一种属、不同部位的细胞所需的时间也不同； 培养条件如温度、pH、培养基的成分等，也会影响分裂周期的长短。 ;整个分裂周期 = 间期（G1期+S期+G2期）+ 分裂期（M期） G1期：DNA合成前期。 S期：DNA合成期。 G2期：DNA合成后期。 细胞分裂一次，即传代一次。 ;2、离体培养常需贴附于基质，并有接触抑制（contact inhibition）现象 （1）贴附生长：除少数悬浮培养的细胞外，大多数正常二倍体（diploid）细胞的生长都需在一定的基质（玻璃、塑料等）上贴附，伸展后才能生长增殖。在无血清培养基内由于不能合成贴附因子，不能实现贴附生长。 ;（2）接触抑制现象（contact inhibition） 当细胞贴附在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片时，即每个细胞与周围的细胞相