鸡传染性贫血PCR诊断方法的建立及其广西流行病学研究-预防兽医学专业论文.docxVIP

蒋玲艳 蒋玲艳 鸡传染性贫血PeR诊颓方法的建立及其广西流行病学研究 鸡传染性贫血PCR诊断方法的建立及其广西流行病学研究 摘要 鸡传染·性贫血(chicken infectious anemia，CIA)由鸡传染性贫血病毒 (chicken infectious anemia virus，CIAV)引起，其主要危害是直接损害鸡的造血 器官和淋巴组织，引起免疫抑制，使鸡对其它病原的易感性增加，导致患病鸡 群的发病和死亡，造成严重的直接或间接经济损失。建立一种能快速、准确地 诊断该病的方法，并应用该方法对本地区该病的流行病学进行研究，同时对 CIAV与其它免疫抑制性病毒共感染的情况以及地方流行毒株核酸序列的特征 等进行分析，为准确而详细地掌握该病对广西养鸡业的危害情况、分子流行病 学及制定有效的疾病防制措施提供理论依据和技术支持。 CIAV基因组编码三种蛋白，其中VP3蛋白(又称凋亡素)是目前已知的该 病毒的唯一致病因子。因此，本研究根据CIAV基因组的特点，参照有关资料， 合成了一对扩增整个VP3基因及部分VPl、VP2基因序列的引物，建立了用于 CIA临床诊断的PCR方法，并在此基础上建立了能同时诊断CIA和三种肿瘤病 的多重PCR方法，直接用于临床上这四种免疫抑制病的诊断、流行病学的调查 及混合感染情况等的研究。通过对常规DNA抽提方法进行改进，使整个诊断过 程可在5个小时内完成，使该法具有快速、特异、敏感等优点，能很好地满足 临床诊断的需要。 应用所建立的诊断方法，于2002年9月～2004年4月期间，对来自广西108 个鸡群共514个病例进行CIAV的检测，并对病例的主要临床特征进行调查记录。 CIAV检测的结果表明，该病毒已在广西鸡群中普遍存在，群阳性率为72，22％ (78／108)，个体阳性率29．96％(154／514)；对不同品种、不同日龄鸡的检测结 广西大学2004届硕士学位论文 广西大学2004届硕士学位论文 果表明，各种品种、不同曰龄鸡均可感染CIAV，其中以快大三黄鸡阳性率最高； 不同器官的检测显示，骨髓的检出率最高。 应用本课题所建立的多重PCR方法，对所收集的病例同时进行CIAV与三 种肿瘤病病毒的检测。此外，对60日龄内病例的鸡群还进行了IBDV的检测。 结果表明，鸡群中多种免疫抑制性病毒混合感染的现象已很普遍，CIAV与MDV、 REV、ALV和IBDV的二重或多重感染率达48．05％；CIAV的感染与三种肿瘤 病病毒的感染具有明显相关性，即CIAV的感染可明显促使三种肿，富病病毒的感 染。 感染鸡群主要临床特征的调查结果表明，鸡群生长阻滞、免疫应答减弱、 鸡群总的发病率和死淘率增加等都与CIAV的感染有关。 从PCR检测为CIAV阳性的样品中选取三个不同地方的毒株进行了核酸序 列的分析。结果表明广西流行毒株与国内外主要参考毒株在所测定的552个核 苷酸序列内同源性高达98．4％以上。 关键词 鸡传染性贫血CIAV混合感染诊断方法多重PCR 流行病学研究免疫抑制肿瘤病病毒 蒋玲艳 蒋玲艳 鸡传染性贫血PeR诊断方法的建立豆其广西流行病学研究 3 THE DEVELOPM匝NT 0F PCR DIAGNOSTIC TECHNIQUE AND EPIDEMIOLOGIC INVESTIGATION OF CHICKEN INFECTIOUS ANEMIA IN GUANGXI ABSTRACT Chicken infectious anemia(CIA)is caused by chicken infectious anemia virus (CIAV)．CIAV directly damages immune organs or tissues of chickens and causes aplastic anemia，generalized lymphoid atrophy and immunosuppression．The affected chickens are more susceptible to the infections of other pathogens．The severity of economic losses depends on the occurrences of secondary infections caused by other pathogens in the subsequence of immunosuppresion．Therefore，it is necessary tO develop a rapid diagnostic technique for detection，epidemiologic investigation and