课件：食品检测培训课件.ppt

分子生物学细菌鉴定 1. 16S rRNA分析 2. 特异片段扩增 3.DNA指纹技术 （RFLP－DNA的限制 性片段长度多态性 , RAPD-随机扩增多态性 ) PCR仪 BD Phoenix System“凤凰”全自动细菌/鉴定药敏系统 　　1．概况1998年Becton Dickinson and Company公司Phonenix全自动细菌鉴定药敏系统 原理 采用荧光增强原理与传统酶、底物生化呈色反应结合。（菌种库270种细菌） MicroScan微生物自动鉴定及药敏系统 概况 MicroScan自动细菌鉴定系统包括半自动系列AutoScan-4以及全自动系列Walkaway 40/96 。是美国最普遍使用的鉴定系列之一。 　　 原理 将荧光物质均匀地混在培养基中，菌种接种到鉴定板，通过检测荧光底物的水解、底物被利用后的pH变化，特殊代谢产物的生成和某些代谢产物的生成率来进行菌种鉴定。 原理：采用传统生化反应，8进位数码鉴定及荧光分析相结合。荧光分析是用荧光标记细菌表面特异酶的底物，经细菌水解底物产生荧光来判断结果 Sensititre (自动荧光法微生物鉴定药敏分析系统 ） AutoReader ARIS（可以自动孵育） VITEK VITEK-ATB(半自动微生物鉴定和药敏系统)Vitek-AMS（全自动细菌鉴定和药敏分析系统 ）　 Vitek II 　 VIDAS 原理：VIDAS(bioMerieux Vitek公司)是应用酶联免疫荧光试验(ELFA)检测食品中的病原菌。即用荧光标记后的抗体检测特异性的抗原 (沙门氏菌、李斯特菌、葡萄球菌毒素、E．Coli O157和单核细胞增生李斯特氏菌) FDA认可使用的检测系统 就到这里！谢谢大家！ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 可编辑 可编辑 一、微生物检测工作的意义 据世界卫生组织估计，在全世界每年数以亿计的食源性疾病患者中，70％是由于食用了各种致病性微生物污染的食品和饮水造成的。2000年至2002年，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所对全国部分省市的生肉、熟肉、乳和乳制品、水产品、蔬菜中的致病菌污染状况的监测结果表明，微生物性食物中毒仍居首位，占39.62％；化学性食物中毒占38.56％；动植物性和原因不明的食物中毒均占10％左右。 传统的微生物检测方法，主要包括形态检查和生化方法，涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁多。 1955年德国学者F.J.Forg 发明了一种简单快速的大肠菌群快速检测法—纸片法，使原来的检测周期由72小时缩短到15小时，材料成本降低了四分之三，同时大大简化了操作程序。从此，这种生化检测方法开始发展起来。 另外，将培养基固化在试剂盒中的速测盒法，也是一种较为简洁快速的检测方法，省去了大量的实验准备工作。 二、开展微生物检测所需的基本条件 无菌室（含紫外灯等消毒设备的隔离空间）； 恒温培养箱； 微生物检测设备、器皿、试剂等； 高压灭菌锅；（灭菌是否彻底） 具备以上设备和无菌操作概念即可进行检测了。 灭菌彻底与否指示 灭菌指示胶带（3M） 生物指示（嗜热脂肪芽孢杆菌 121.1℃） 紫外灯相关 强度：对室内空气的消毒，直接照射法：采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外线消毒灯（30Ｗ紫外灯，在1.0m 处的强度 70μW/cm2）的数量为平均每立方米不少于 1.5W，照射时间不少于30min。 更换频率：紫外线灯使用过程中其辐照强度逐渐降低，故应定期测定消毒紫外线的强度，一旦降到要求的强度以下时，应及时更换。 紫外线消毒灯的使用寿命，即由新灯的强度降低到70μW/cm2 的时间(功率≥30W)，或降低到原来新灯强度的 70%（功率 30Ｗ）的时间，应不低于 1000h。紫外线灯管有高硼玻璃和石英玻璃之分，由于高硼玻璃的UV254nm紫外线透过率只有50%左右，一般只有1000小时；石英是紫外线透过率最高的材料，普通石英可以透过UV254的80%以上，石英玻璃紫外线灯寿命一般大于6000小时，进口的紫外线灯可以到8000h以上，部分厂家可以达到1200小时。 紫外线强度计至少1年标定1次 。 紫外线辐照时间计算 照射剂量和时间：不同种类的微生物对紫外线的敏感性不同，用紫外线消毒时必须使用照射剂量达到杀灭目标微生物所需的照射剂量。杀灭一般细菌繁殖体时，应使照射剂量达到10 000μW.s/cm2；杀灭细菌芽孢时应达到100 000μW.s/cm2；病毒对紫外线的抵抗力介于细菌繁殖体和芽胞之间；真菌孢子的抵抗力比细菌芽孢更强，有时需要照射到600 000μW