环磷酰胺预处理、短程环孢素A联合骨髓腔内输注供者骨髓诱导大白兔特异性免疫耐受的分析-内科学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得壹量叁堂或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论专作者虢彬铀鼍签字日期．弘年．c|月∽日 ＼ 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 壹曼圭堂 有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阿和 借阅。本人授权南昌太学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 夭切吣弋 导师签名：俑孵 签字日期：矿几年1【口月—旷日、 签字日期：妒占年f月，o日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 环磷酰胺预处理、短程环孢素A联合骨髓腔内输注供者骨髓诱导 环磷酰胺预处理、短程环孢素A联合骨髓腔内输注供者骨髓诱导 大白兔特异性免疫耐受的研究 研究生 杨新平 导师 陈国安 摘要 【目的】通过对受者环磷酰胺预处理、短程环孢素A应用及供者骨髓细胞、 供受者融合后骨髓细胞骨髓腔内输注，观察对移植皮肤存活的影响，进而探 索一种适合临床应用的诱导免疫耐受的方法。 【材料与方法】雌、雄性新西兰大白兔各36只，15—20周龄，重2．0—2．5Kg， 购白南昌大学医学院动物中心，饲养于南昌大学第一附属医院动物房。雄性 作为供者，雌性作为受者，随机配对，将36对大白兔再随机分为6组：即空 白对照组、单纯预处理组、单纯骨髓输注组、实验1组、实验2组、无关供 体对照组。实验1组应用环磷酰胺lOOmg／kg／d(一4一一3d)、环孢素A (10mg／kg／d(一1--+lOd)+供者造血干细胞骨髓腔内输注组(骨髓单个核细 胞4×108)，实验2组应用环磷酰胺lOOmg／kg／d(一4一一3d)、环孢素A (10mg／kg／d(一1--+lOd)+供、受体融合后骨髓细胞骨髓腔内输注。各组在 输注骨髓的同‘天进行皮肤移植，观察移植皮肤存活时间、对第三者皮肤的 排斥反应及对供体的单向混合淋巴细胞反应，并用多聚酶链反应(PCR)检测 Y染色体特有的性别决定基因(SRY)以证实嵌合体的形成。 【结果】(1)单纯骨髓细胞输注组和单纯低剂量预处理+环孢素A组在移植 后30天均检测不到供受者混合嵌合体，移植皮肤的存活时间分别为11．33± 0．82天、16．33±1．2l天；联合应用低剂量的预处理、短程免疫抑制剂和供 者骨髓细胞输注组在移植后30天可检测到供受者混合嵌合体，移植皮肤存活 时间为44．67±3．20灭；供受者融合细胞输注组移植皮肤存活时问为39．67 ±1．21天，骨髓移植后30天可检测到嵌合体。实验1组皮肤存活时间(44．67 ±3．20天)、实验2组(39．67±1．21天)比空白对照组(10．83±0．75天)、单 纯预处理组(16．83±1．21)、单纯骨髓输注组(11．33±0．82天)、无关供体 ±1．47天)明显延长(PO．01)。 ±1．47天)明显延长(PO．01)。 (2)供者骨髓细胞输注与供、受者融合后骨 髓细胞输注比较，移植皮肤生存期无显著性差异(PO．05)。(3)耐受诱导20 天时，第四、第五组受者对供者淋巴细胞的单向混合淋巴细胞反应较移植前 特异性降低，A490值分别为(0．41±0．063)、(0．45±0．019)，移植前为(1．44 ±0．041)，对无关第三者的反应性为(1．35±O．680)，移植后与移植前及无 关第三者相比较，差异均有显著性(Po．01)，移植前与无关第三者比较无 显著差异(PO．05)。 【结论】l、在大白兔动物模型中，采用环磷酰胺预处理、短程环孢素A免疫 抑和输注供者骨髓细胞能诱导供受者造血嵌合体形成。 2、骨髓细胞直接输注或供受者骨髓融合细胞输注均能获得较稳定的 混合嵌合体，延长移植皮肤生存时间，诱导供者特异性免疫耐受。 3、供者骨髓细胞输注与皮肤移植同时进行能获得良好的免疫耐受。 4、骨髓腔内输注骨髓细胞并发症少、植入率高。 【关键词】骨髓移植；嵌合体；特异性免疫耐受；细胞融合；大白兔。 Inducti。n。f Inducti。n。f donor-type chimerism and transplantati。n tolerance in non—myeloablatiVe rabbit by intra-bone。—marro