霍山石斛多糖及其酶解片段抑制H2O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡的研究-植物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 A Dissertation Submitted for the Degree of Master Dendrobium huoshanense polysaccharide and its enzymatic derivatives inhibit the apoptosis of Human Lens Epithelial Cell induced by H2O2 By Li Xiaolong Hefei University of Technology Hefei, Anhui, P.R.China 03, 2014 万方数据 万方数据 合肥工业大学 本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合合肥工业 大学学历硕士学位论文质量要求 d 答辩委员会签名(工作单位、职称、姓名〉 主席:中国科学院昆明植物所，研究员，邱明华 委员:合肥工业大学，教授，汪惠丽， 合肥工业大学，教授，韩毅 合肥工业大学，教授，牛向丽 合肥工业大学，副教授，江力 7多气 如论\ (号?看 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标志和致谢的地方外，论文中不包含其他 人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得合肥工业大学 或其他教育 机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签字:如先签字明》怦铲月 (6日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解合肥工业大学 有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅或 借阅。本人授权 合肥工业大学 可以将学位论文的全部或部分论文内容编入有 关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文者签名:乡 L 在 导阳事式与 签字日期 : i年吁月 16 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 通讯地址:  电话: 邮编: 致 谢 时光荏苒，转眼间三年的研究生生活即将结束。在这三年艰辛而快乐的时光 里，我收获颇丰：收获了坚持不懈的拼搏精神、收获了乐观向上的生活态度、收 获了精益求精的处事方式、收获了同甘共苦的美丽友谊。 首先，我要感谢我的导师査学强教授。从实验的选题、实验方案的制定到实 验的进行再到论文的撰写都离不开査老师的悉心教导与备至关怀。他严谨的科研 态度、端正的科研作风、渊博的科学知识都深深的影响了我，让我受益终身。 其次，我要感谢罗建平老师、潘利华老师、杨雪飞老师和王军辉老师，在三 年的实验和生活中，他们给予了我无微不至的关怀和指导；我还要感谢陈晓燕老 师、刘健老师、苏婧婧老师在实验仪器设备使用上提供的热心帮助。 再次，我要感谢实验室的所有同学们，三年来，他们在实验和生活上都给了 我无私的帮助和关怀。在实验室这个大家庭里，我们互相帮助、互相鼓励，虽然 三年的时间很快就结束了，但我相信我们友谊一定会地久天长。 最后，我要特别感谢一直默默支持与鼓励我的父母，这么多年来，是他们一 直无怨无悔的供养着我，没有他们无私的呵护，我不可能取得今天的成绩。 作者：李小龙 2014 年 4 月 3 日 I 摘 要 霍山石斛为兰科多年生草本植物，是我国传统的名贵中草药。多糖是霍山石 斛的主要活性成分之一，具有抗肿瘤、抗氧化、抗白内障和免疫调节等多种生物 活性。我们的前期研究发现，霍山石斛多糖具有较强的抗白内障活性。由于晶状 体上皮细胞凋亡是白内障发生的主要病理机制之一，所以本课题以此为切入点， 采用酶解分子修饰方法，对霍山石斛多糖抑制晶状体上皮细胞凋亡的分子调控机 制及其构效关系进行了研究，主要实验结果如下： （1）霍山石斛多糖的分离纯化和酶法修饰：霍山石斛类原球茎经水提醇沉获 得总多糖，再利用 DEAE-Cellulose 阴离子交换层色谱以及膜分离技术（截留分 子量 8000 Da 和 3500 Da）对其进行分离纯化，获得多糖均一组分 DHPD1。酶筛 选研究发现，果胶酶较适合 DHPD1 的酶解修饰。通过单因素实验、响应面分析 获得果胶酶降解修饰的最优条件为：酶浓度 126 U/mL，反应 pH 4.46，反应温度 48℃。在此优化条件下，以 DHPD1 为起始分子，通过改变反应时间（1 h, 8 h, 24 h），获得了三种酶解片段 DHPD1-1H、DHPD1-8H 和 DHPD1-24H，分子量分别 为 2535 Da、1997 Da 和 1552 Da。 （2）DHPD1 酶 解 片 段 的 结构 表征 ： 单糖组成分析表明， DHPD1-1H、 DHPD1-8H 和 DHPD1-24H 均由 Ar