肌卫星细胞体外培养及相关性状的研究-骨科专业论文.docxVIP

m-ff,y医科大掌2003屠硕士研究生毕业论文 m-ff,y医科大掌2003屠硕士研究生毕业论文 骨科 肌卫星细胞体外培养及相关性状的研究 研究生李钢 导师刘强 韩树峰 摘 要 ¨的：原代分离、纯化、培养大鼠肌卫星细胞，观察体外培养 肌卫星细胞的增殖与分化特性及对IGF刺激的反应，并为肌卫 星细胞移植防治失神经肌萎缩方面做～些前期准备工作。 方法：运用两步酶消化法分离卫星细胞，不连续密度梯度离心 法纯化后体外培养，观察其生长与分化特性，运用MTT法测 定卫星细胞对不同浓度IGF(类胰岛素刺激因子)刺激的反应， )i二运用频繁传代的方法获取足量单个肌卫星细胞。 结果：此方法可以获得足量、纯度较高的肌卫星细胞，适宜浓 度的IGF对肌卫星细胞有较强的促增殖及促分化作用，频繁传 代可以获取足量的单个肌卫星细胞，为肌卫星细胞移植做好了 简期准备。 荚键词 卫星细胞 IGF 移植 n|日E科^#2003月Ⅷ±究l}m*★ n|日E科^#2003月Ⅷ±究l}m*★ 日·科 Culture and characteristics of mouse skeletal muscle satellite cell [Abstract] Obj ective：To observe the proliferation and differentiation properties of mouse skeletal muscle satellite cell and the effect of IGF—l it，which is cultured and purified in vitro，and make preparation for satellite cell transplanting．Methods the cells isolated by two—step enzyme digestion and purified by the Percoll density centrifngation，the proliferation and differentiation propertiesof which being observed．To study the effect of 1GF．1 satellite cell with MTT method and obtain adequate single satellite cell by frequent passaging．Conclusion Plenty and purified satellite cells obtained with these methods．IGF—l could promote the proliferation and differentiation of mouse skeletal muscle satellite cell．Adequate single satell ite cell could be obtained by frequent passaging method and the preparation are ready for for satellite cell transplanting Key words：Satellite cell IGF Transplant 山西医科丈掌2003启司《士研究生毕业论文前言 山西医科丈掌2003启司《士研究生毕业论文 前言 肌卫星细胞位于骨骼肌肌膜和基底膜之问，是一种肌源 性干细胞，可以转化为成肌细胞，在骨骼肌细胞生长和再生时 提供细胞核。 体外培养的肌卫星细胞可应用于创伤修复 、防治失神 经肌萎缩，治疗DMD阳1(杜兴肌营养不良症)及截瘫，在 组织：r程阳1和基因治疗n 3等方面亦有一定的应用前景，因此， 有必要研究其分离、纯化及培养方法，并对其特性进一步研究。 1材料与方法 1．1主要试剂及仪器 呤WISTAR大鼠购自山西医科大学动物中心 冷胰蛋白酶购自GIBICAL公司 夺胶原酶购自WORTHINGTON BIOCHEMICAI。公司 DMEM／F12购自HYCLONE公司 令PERCOLL购自AMERSHAM PHARMACIA BIOTECH 公司IGF购自SIGMA公司 夺结蛋白抗体购自福建迈新公司 令肌动蛋白抗体、SABC试剂盒购自武汉博士得公司 夺CYCLE TEST PLUS DNA REAGENT KIT购自美国 m*＆科^掌2003扁硕±究生毕业论文 m*＆科^掌2003扁硕±究生毕业论文 骨科 BD公司 夺HER