缓激肽对高糖诱导人系膜细胞表达CTGF和FN的影响及与JNK途径的相关性-内科学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 套蚜 签字日期： 旦年』月上日 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名：_奎堑 指导教师签名：一￡垒!丛 签字日期：，夕竺翌年上月卫日 缓激肽对高糖诱导人系膜细胞表达CTGF和FN的影响 缓激肽对高糖诱导人系膜细胞表达CTGF和FN的影响 及与JNK途径的相关性 硕士研究生： 李 妍 指导教师： 赵久阳 教授 指导小组 刘春艳 副教授 徐茂兰 副教授 专业名称： 内科学 摘 要 日的：本实验以体外培养永生代人系膜细胞为研究对象，观察缓激 肽(bradykinin，BK)对高糖诱导的细胞产生结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)、纤连蛋白(fibronectin，FN)及C．Jun氨基末端 激酶(C-JunNH2．terminal kinase，JNK)通路活化的影响，采用BK—B2受体 阻断剂、JNK通路阻断剂探讨BK对CTGF和FN的影响与JNK通路的 相关性，以阐明BK对肾纤维化的作用及其机制，为临床肾纤维化的预 防、治疗提供新的思路和方法。 方法： 1．为了观察BK不同浓度对高糖诱导的细胞的影响，系膜细胞用不 同浓度的BK(O，10，100，1000ng／m1)孵育1 5分钟后和高糖(30mmol／1) 共同孵育48小时，用RT．PCR法检测细胞CTGFmRNA和FNmRNA的表 达。 2．为了观察BK作用不同时间对高糖诱导的细胞的影响，用相同浓 度的BK(100ng／m1)孵育细胞l 5分钟后和高糖(30mmol／1)共同孵育24 h、 48h、72h，用RT．PCR法检测细胞CTGFmRNA和FNmRNA的表达。 3．为了观察BK对高糖诱导细胞磷酸化JNK蛋白的影响，用同浓度 BK(100ng／m1)孵育细胞l 5分钟后和高糖(30mmol／1)共同孵育30分钟，用 Western Blotting法检测JNK磷酸化蛋白的瞬间表达。 4．用BK．B2受体阻断剂HOE．140(1umol／L)和JNK通路阻断剂 SP一600125(10umol／1)孵育细胞15min后，加入BK(100ng／m1)孵育15 min， 再加入高糖(30mmol／1)，分别用RT_PcR法测CTGF mRNA及F N mRNA 的表达和用Western 的表达和用Western Blotting法测磷酸化JNK蛋白的表达量。 细胞分为正常葡萄糖浓度的对照组、高糖组、BK不同浓度加高糖组、 BK—B2受体阻断剂加BK加高糖组、JNK通路阻断剂加BK加高糖组。 结果： 1．BK随浓度的增加对高糖诱导的细胞表达CTGFmRNA的抑制作 用逐渐增强，且有统计学差异(P0．01)；而使用BK—B2受体阻断剂后， 这种抑制作用减弱，与BK加高糖组比表达量增多，但仍低于高糖组， 有统计学差异(P0．05)；即BK通过B2受体不能完全抑制高糖诱导细胞 CTGF的表达。 2．同浓度BK与高糖共同作用细胞48h、72h时，细胞cTGFmRNA 的表达量均较相对应的高糖组减少，有统计学差异(P0．01)；BK加高糖 组在24h、48h、72h表达量随时间增加逐渐减少，组间比有统计学差异 (P0．01)：即同浓度BK在24h、48h、72h对高糖诱导细胞CTGF mRNA 的表达量有抑制的作用，抑制作用呈时间依赖性。 3．BK不同浓度加高糖组作用48h，组间比及与高糖组比，FNmRNA 的表达量无统计学差异(PO．05)；加入BK—B2受体阻断剂后，与未加入 阻断剂的BK加高糖组及高糖组比，也无统计学差异(P0．05)：即BK不 同浓度在48h对高糖诱导细胞的FNmRNA的表达量无影响。 4．BK加高糖组在24h、48h与相应高糖组比FNmRNA的表达量无 统计学差异(PO．05)，而72h表达量减少，有统